质粒pHL3.进一步构建含有与pHL3相同metK的回补质粒,pCas,pHL3及回补质粒依次转化即可完成基因组必需基因的高效无痕敲除.该方法对必需基因metK编辑时编辑效率可达100%.为了研究必需基因的酶学性质改变对宿主代谢的影响,探索了基于质粒不相容及Flp/FRT系统对回补质粒的置换效率,发现基于Flp/FRT系统可实现回补质粒高效置换....