反转录PCR(Reverse Transcription,RT-PCR)又称为逆转录PCR。其原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。 2.反转录试剂盒 3.PCR酶和PCR体系 试剂盒: 其他试剂盒: 4.PCR程序 注:具体操...
一步法RT—PCR反应更加快速、灵敏,操作简便,污染率低,RNA二级结构减少,并且因为聚合酶有校正活性,从而降低了PCR反应的错配率。而在两步法中,反应的精确度高,人为的误差相对较小,并且由于在第一步中将RNA反转录为cDNA,从而更易于保存。另外,两步法的整个过程比一步法更节省费用。传统检测方法的样品用量一般在ug级...
解析 反转录PCR 是将RNA的反转录反应和PCR反应联合应用的一种技术。即首先以RNA为模板,在反转录酶的作用下合成cDNA,再以cDNA为模板通过PCR反应来扩增目的基因。该技术是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序列的RNA进行定性定量分析的最有效方法之一。
若已知目的基因的序列，则可根据基因序列设计特定的引物。以水稻肌动蛋白的编码基因OsActinl为例，我们可以进行反转录和RT-PCR分析。OsActinl基因在水稻基因表达研究中常作为内参基因使用。在引物设计方面，可以参考相关文章，如《无需自己设计qPCR引物：涵盖66种植物3331426个基因引物及115种植物qPCR内参基因数据库的指...
- **A. 克隆cDNA**:反转录PCR(RT-PCR)通过将RNA逆转录为cDNA后进行扩增,生成的cDNA可插入载体进行克隆,因此正确。 - **B. 合成cDNA探针**:RT-PCR产生的cDNA片段可用作探针(如用于杂交实验),因此正确。 - **C. 检测DNA病毒**:DNA病毒的基因组可直接用普通PCR检测,无需反转录步骤,因此错误。 - **D....
反转录PCR（RTPCR）实验步骤其实是一个非常精细得操作过程它涉及从RNA到cDNA的转化，再从cDNA到特定DNA片段的扩增。这一过程对分子生物学研究至关重要，尤其是在基因表达研究、病毒检测以及疾病诊断中，RTPCR实验几乎是不可或缺的工具。刚开始时最重要得第一步就是从细胞或组织样本中提取RNA。这看似简单的一步，却...
建议使用热启动型反转录酶，在预变性阶段设置70℃5分钟激活酶活性，有效减少引物二聚体形成。引物设计遵循 值差异不超过2℃原则，针对GC富集区域采用降落PCR策略。使用OligoAnalyzer软件验证发夹结构形成能，要求 kcal/mol。当扩增长度超过2kb时，建议采用巢式PCR分步扩增，首轮循环数控制在20-25个，第二轮使用巢式引物...
RT-PCR:特指反转录PCR (Reverse Transcription-PCR),即以RNA为模板反转录成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。 qPCR:指实时荧光定量PCR(quantitative Real time-PCR ),即PCR过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行精确的分析。 Real time PCR:一般缩写为 qPCR,与qPCR定义相同。
PCR操作的反转录步骤分为两个主要阶段：总RNA的提取和cDNA第一链的合成，以及随后的PCR反应。首先，从样本中提取总RNA。通常取1-5微克RNA，加入DEPC H2O至11微升，再加入Oligo（dT）12-18进行混合。将混合液加热至70℃10分钟后，迅速冷却至冰浴。接下来，按照配方加入SuperScriptTM Preamplification ...
一个可能做反转录PCR的,另一个可能做实时定量荧光PCR的.反转录PCR由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”,由依赖RNA的DNA聚合酶(逆转录酶)来完成.随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚... 分析总结。 反转录pcr由一条rna单链转录为互补dnacdna称作逆转录由依赖rna的dna聚合酶逆转录...