反转录PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR),是指以mRNA为模板 在反转录酶作用下合成的cDNA 第一链的PCR。该反应分为两步,第一步在单引物的介导和反转录酶的催化下合成RNA 的互补链cDNA; 第二步加热后cDNA 与RNA 链解离,然后与另一引物退火,并由DNA 聚合酶催化引物延伸生成双链DNA,最后同常规PCR一样,扩...
反转录PCR(Reverse Transcription,RT-PCR)又称为逆转录PCR。其原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达。 2.反转录试剂盒 3.PCR酶和PCR体系 试剂盒: 其他试剂盒: 4.PCR程序 注:具体操...
RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用，从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，在DNA聚合酶作用下扩增合成目的片段。RT—PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平、细胞中RNA病毒的含量和直接克隆...
一步法RT—PCR反应更加快速、灵敏,操作简便,污染率低,RNA二级结构减少,并且因为聚合酶有校正活性,从而降低了PCR反应的错配率。而在两步法中,反应的精确度高,人为的误差相对较小,并且由于在第一步中将RNA反转录为cDNA,从而更易于保存。另外,两步法的整个过程比一步法更节省费用。传统检测方法的样品用量一般在ug级...
解析 反转录PCR 是将RNA的反转录反应和PCR反应联合应用的一种技术。即首先以RNA为模板,在反转录酶的作用下合成cDNA,再以cDNA为模板通过PCR反应来扩增目的基因。该技术是目前从组织或细胞中获得目的基因以及对已知序列的RNA进行定性定量分析的最有效方法之一。
紧接着，以生成的单链cDNA为模板，通过PCR技术扩增出目的基因的全长或部分特定片段，这一系列操作统称为反转录PCR，即RT-PCR。RT-PCR已成为检测基因时空表达特性和表达水平的核心方法，其灵敏度极高，是基因功能研究的关键技术。在利用RT-PCR扩增基因片段以构建表达载体时，为确保PCR过程的准确性，通常会选用保真性...
一、反转录PCR原理 反转录PCR的主要原理是利用病毒逆转录酶(Reverse Transcriptase)将RNA模板反转录合成对应的cDNA。逆转录酶可合成一条cDNA链,作为PCR反应的起始物。接下来,使用DNA聚合酶进行PCR扩增,即将cDNA扩增为足够数量的DNA分子。最终通过PCR产物的检测和分析,可以获得RNA模板的相关信息。 二、反转录PCR技术步骤...
RT-PCR:特指反转录PCR (Reverse Transcription-PCR),即以RNA为模板反转录成cDNA,再以cDNA为模板进行PCR扩增。 qPCR:指实时荧光定量PCR(quantitative Real time-PCR ),即PCR过程中每个循环都有数据的实时记录,因此可以对起始模板数量进行精确的分析。 Real time PCR:一般缩写为 qPCR,与qPCR定义相同。
原位反转录PCR(in situ reverse transcription PCR, In Situ RT-PCR)是将液相的RT-PCR技术应用到组织细胞标本中的一种新技术,与RT-PCR(液相)不同点在于,进行原位反转录PCR反应之前,组织标本要先用DNA酶处理,以破坏组织中的DNA酶,这样才能保证扩增的模板是从mRNA反转录合成的cDNA,而不是细胞中原有的DNA。其它...