寡核苷酸脱氧胸苷(oligo(dT)),模板3’端的序列有可能被过量拷贝,从而在cDNA中所占比例过大,这取决于反转录酶的质量及反应条件。随机序列的寡核苷酸,旨在使用序列极为多样的一个寡核苷酸集群,以期至少有一些寡核苷酸与模板退火并作为反转录的引物;特定序列的寡核苷酸,作为合成与某一段特定的mRNA相对应的cDNA的引物。反馈 收藏
反转录 引物 两种引物通过互补配对与两条单链DNA结合 启动子具有(物种及组织)特异性 酚类 繁殖快;单细胞;遗传物质少 大肠杆菌没有生物膜系统(或内质网和高尔基体),不能对rHSA进行深加工 rHSA可能没有生物活性或功能性较差或rHSA可能有安全隐忠相关知识点: ...
❖ DNA聚合:在此步骤中,反应温度和持续时间可能会根据所使用的引物和反转录酶而变化。使用oligo (dT)引物(Tm〜35-50 ℃),可以在反转录酶的最佳反应温度(37-50 ℃)下直接孵育反应。随机六聚体引物因其较短的长度,通常具有较低的Tm(〜10-15℃)。因此,当使用随机六聚...
例(1)尽管流感病毒基因组中不含有polyA尾,但其感染细胞后,能够在细胞内获得5'帽子和3'polyA尾,因此从流感病毒感染的细胞中扩增基因反转录,可以用oligo (dT) 引物,这时模版其实是病毒的mRNA,而不是vRNA。 因为流感病毒的每个基因节段都含有长度不等的末端重复区(UTR),因此也可以用其基因3'端的一个保守的12nt...
常规反转录酶发挥作用的最佳温度在42℃左右,但常规温度很难打开复杂模板中的二级结构,直接阻碍cDNA的继续合成;选择热稳定性高的反转录酶,可以在高温打开复杂模板中二级结构的同时发挥作用,极大的提高了复杂模板的反转录效率(图3)。 图3 3)反转录引物的选择 ...
反转录过程中可用作复制引物的是 A. 病毒自身的mRNA B. 病毒自身的tRNA C. 病毒自身的rRNA D. 宿主细胞的tRNA
解析 tRNA 反转录酶在逆转录过程中需要引物来启动DNA的合成。自然情况下,如逆转录病毒HIV中,该引物通常来自宿主细胞的tRNA(如tRNALys3),其3'端与病毒RNA的引物结合位点互补配对,从而提供游离的羟基起始链的延伸。实验室中可能使用寡核苷酸如oligo(dT),但题目未提及语境,故默认自然场景,答案为tRNA。
qPCR用反转录试剂盒(引物可选择),【产品概述】GeniuScript III Select RT Kit for qPCR是基于GeniuScript III RT Kit for qPCR开发的引物可选择型逆转录试剂盒,适用于两步法
引物策略 反转录引物一般分为三类: oligo dT、随机引物、基因特异性引物。oligo dT,可识别有poly(A)尾的真核mRNA,从而获得真核生物mRNA全长。随机引物,可以结合到样本中的任何类型RNA,但并不能获得整个基因全长的CDNA。基因特异性引物,是根据实验者的特定需求设计出来的,适用于目的序列已知的情况,产生所需的cDNA...
可以是相同的引物。RT-PCR中的One-step PCR就是在反转录cDNA和 PCR 扩增一步完成，使用的就是你说的...