原位杂交实验组织石蜡包埋,将包埋好的蜡块从-20℃取出,刀片、台面、切片机等用RNase抑制剂喷雾喷洒擦净,修整好的蜡块固定于切片机上,切片厚度设置为5μm,将蜡带在43℃ DEPC水中水浴展开,用多聚赖氨酸处理过的圆形玻片捞取蜡带,置于锡箔纸褶皱上37℃烘干过夜。 3、脱蜡与复水 镊子夹取圆形玻片依次于下述玻璃...
原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待测DNA或RNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,经一定的检测手段将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件:...
原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。 原位杂交实验原理 原位杂交技术的基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基序列,将有放射性或非放射性的外源核酸(即探针)与组织、细胞或染色体上待...
RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用RNA或核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体(Hybrids)经...
原位杂交(In situ hybridization, ISH)已成为一种常用的实验室技术,用于分析基因表达和细胞中特定DNA和RNA分子的定位,已发展成为基础科学研究和临床诊断的重要工具。ISH的目标之一是原位定位基因序列,并在保持细胞完整性的同时可视化细胞内的产物。这允许对异质组织内的局部产物进行有意义的解剖和组织学解释。由于ISH检测...
原位杂交组织(或细胞)化学 (In situ Hybridization Histochemistry,ISHH) 简称原位杂交(In Situ Hybridization),属于固相分子杂交的范畴,它是用标记的DNA或RNA为探针,在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同,原位杂交可分为DNA-DNA杂交,DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交三类。
原位杂交检测步骤 原位杂交涉及的步骤:玻片的准备和样品固定,细胞或组织的预渗透处理,靶DNA变性(DNA原位杂交),探针制备,原位杂交过程,杂交后洗涤,探针(显色)检测。 1. 玻片的准备和样品固定 对于染色体涂片,1:1的乙醇/醚处理的载玻片已能符合要求。对于组织切片的原位杂交,为了在实验过程中不丢失组织样品,可使用多...
原位杂交组织（或细胞）化学，简称原位杂交（In Situ Hybridization，ISH），它是运用已知碱基序列并带有标记物的核酸探针与组织细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，然后再运用与标记物相应的显示或检测系统，通过组织化学或免疫细胞化学等方法在核酸原有的位置进行细胞内核酸（DNA、RNA）定位的...
原位杂交技术(in situ hybridization)是以标记的核酸分子为探针,在组织细胞原位检测特异核酸分子的技术。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交,再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测,从
原位杂交(ISH)是核酸分子杂交的一部分,是将组织化学与分子生物学技术相结合起来检测和定位核酸的技术。 原位杂交可应用于: 1.细胞特异性mRNA转录的定位可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。 2.感染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位,如EB病毒mRNA、人类乳头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。 3.癌基因、抑癌...