原代细胞培养的主要步骤包括: 剥离组织,去除外膜、结缔组织等:将组织从动物体中取出,并去除可能存在的外膜或结缔组织等杂质。 洗涤后将组织剪成1mm左右的小块:使用生理盐水或其他适当的缓冲液洗涤组织,然后将其剪成约1mm大小的小块。 用0.1%～0.2%的胰酶消化:将剪碎的组织块加入含有0.1%～0.2%胰酶的缓冲液中,进...
原代细胞培养操作步骤：1、吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。2、向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜。3、置37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，2~5min后把培养瓶放在 倒置显微镜 下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化。4、吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量...
原代细胞培养需经过准备、处理、剪切、消化分离、计数、培养这几个阶段。具体说明如下: 1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,进行操作前的洗手、消毒。 2、处理:点燃酒精灯,把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污。 3、剪切:用手术刀将组织切成若干小块,加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶...
利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。 操作步骤如下 1、剪切组织：先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。再次清洗后，用手术刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用...
01 原代培养操作步骤 原代培养的操作步骤为：取材→分离→培养。（1）取材：对于不同的组织有不同的取材方法（Uysal et al., 2018；司徒镇强,吴军正., 2007）具体见表1，但均应保持材料的新鲜及严格无菌。表1 不同组织的取材方法 （2）分离：不同的组织类型采用不同的分离方法（Uysal et al., 2018；司徒...
⑴原代培养:取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称原代培养。 ⑵原代培养方法分类:贴块法和消化法。消化法又分为冷消化与热消化;一次性消化与分次消化。 主要步骤: 贴块法:将取得洗净并剔去多余成分的组织切成约1mm 3 大小的植块,用于植块培养。 消化法:将取得洗净并剔去多余成分的组织剪碎...
原代细胞培养的步骤：取材→分离→培养和维持 1、取材 人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。(1) 取材的基本要求 ① 取材要注意新鲜和保鲜 ② 应严格无菌 ③ 防止机械损伤 ④ 去除无用组织和避免干燥 ⑤ 应注意组织类型、分化程度、年龄等 ⑥ 作好记录 2、分离 人或动物体内...
5.若进行组织块培养,则不做步骤4,加入几滴血清于组织块中,再用弯头吸管将组织块悬液吸起。在一小培养瓶中逐个铺展开,注意将瓶底涂抹均匀。将瓶子翻转倒置后在37℃培养箱内放置2-3h。待组织块微干与瓶壁粘牢后再轻轻将瓶子翻转过来,从边角加入4~5mL培养基,使细胞接触到培养基,放培养箱内继续进行培养。
1. 细胞生命力脆弱:离体培养的细胞非常脆弱,因此在传代时,细胞尚未覆盖培养瓶底壁面积的80%时,不宜急于传代。 消化时间差异:原代培养中细胞类型多样,不同细胞的消化时间不同,因此传代时需根据具体情况及时处理。 有序吹打:对贴壁细胞进行消化后,吹打过程需有序进行,从一边到另一边,确保所有细胞都能被吹打脱离瓶壁...