常用的分离胶浓度有6%、8%、10%、12%,分子量越大,所用的胶浓度越低,蛋白电泳速度越快。例如,测定100kDa分子量以上的蛋白可选择8%浓度的分离胶;测定20kDa分子量以下的蛋白可选择15%浓度的分离胶,中间的分子量可选用12%浓度的分离胶。 在Western Blot(WB)实验中,SDS-PAGE分离胶通常根据分子量范围的需求来选择...
不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样,比如15%的分离胶更适合45kDa的分目的蛋白,...
在选择分离胶与浓缩胶的浓度时,首先要考虑实验目的。例如,若需要分离混合物中的多个组分,可能需要选择较低的胶体浓度以获得更好的分辨率;而若仅关注某一特定组分的浓缩,则可能需要选择较高的胶体浓度。 此外,样品的性质也是影响胶体浓度选择的重要因素。例如,...
如果以溴酚蓝跑到胶的底部为准,26kD在10%的由下往上1/4的地方,而15%就在由下往上大约1/2(不太确定)的地方,对于分子量比较小的蛋白,当然是胶的浓度越大,分离效果越好.但是你必须考虑到,胶的孔径一旦小于蛋白-SDS复合体的直径,分子量大于这个蛋白的所有蛋白仍然不能有好的分离效果.如果孔径太大,所有蛋白都...
在SDS-PAGE中,分离胶的浓度是根据目的蛋白的分子量来选择的。分离胶的浓度决定了蛋白质在电泳过程中的迁移速度。较低浓度的分离胶适用于较大分子量的蛋白质,而较高浓度的分离胶适用于较小分子量的蛋白质。 一抗蛋白的分子量与分离胶的浓度无直接关系。一抗蛋白的分子量是指用于检测目的蛋白的抗体的分子量。一抗...
聚丙烯酰胺凝胶浓度/% 蛋白质分离范围/kd5 36—2007.5 24—20010 14—20012.5 14—10015 14—60浓缩胶浓度低;分离胶浓度高于浓缩胶,一般不小于5%。8KD的蛋白质可能就要用Tricine–SDS-PAGE系统,因为浓缩胶和分离胶浓度太大,电泳速度很忙,很可能引起电泳带弥散。
不知道分子量的情况下就尽可能选择浓度高的分离胶,因为浓度低的胶很有可能蛋白就跑出去了。先用高浓度的胶跑一次,然后看条带再调整下分离胶浓度再做一次就行了。另外,一般快速测定蛋白浓度的方法就是用分光光度计测量A280的吸光度,然后按照小牛血清蛋白(BSA)作标准曲线初步评估蛋白浓度。BSA在A280的吸光度为0.6的...
根据目的蛋白的分子量大小选择不同浓度的分离胶,8%、12%和15%三种浓度的分离胶就完全可以搞定日常蛋白的测定。一般测定100kDa分子量以上的蛋白可选择8%浓度的分离胶;测定20kDa分子量以下的蛋白可选择15%浓度的分离胶,中间的分子量可选用12%浓度的分离胶。有的时候蛋白跑不出来,其实未必是分离胶浓度...
1.配制分离胶浓度8%、体积15ml H2O 6.9ml 30%凝胶贮备液 4.0ml 1.5mol/L Tris-HCl(pH8.8) 3.8ml 10%SDS 0.15ml 10%过硫酸胺 0.15ml TEMED 0.01ml 2.一旦加入TEMED,混匀后立即小心地将分离胶注入准备好的玻璃板间隙中,为成层胶留有足够空间。用毛细管轻轻在其顶层加入几毫升正丁醇,以阻止空气中的氧气对...