术语"Blotting或印迹"指的是将凝胶中的生物样品转移到膜上,然后在膜表面进行检测。蛋白免疫印迹实验,或Western Blot(又称为免疫印迹,因为使用了抗体来特异性检测其抗原)于1979年由 Towbin 等人提出,现在已是常规的蛋白分析技术。抗体-抗原相互作用的特异性实...
一、实验原理 Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被洗...
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
实验流程 WB常规实验流程 步骤: 一、试剂准备 二、蛋白样品制备 三、蛋白含量的测定 四、SDS - PAGE电泳 五、转膜 六、免疫反应 七、化学发光,显影,定影 八、凝胶图象分析 实验准备 实验材料:蛋白质样品。 试剂、试剂盒:裂解液 PBS G 250考马斯亮蓝溶液 NaCl SDS上样缓冲液 电泳缓冲液 转移缓冲液 丽春红染...
蛋白免疫印迹（Western Blot）Buffer的准备 1）准备甲醇和ddH2O；2）配制1× PBST：500 mL 1× PBS+0.25 mL tween 20；3）配制5%的BSA封闭液：2.5 g的BSA溶解到50 mL 1x PBST中；4）配制一抗，二抗：用5%的BSA封闭液按说明书推荐比例稀释(一般新买的培养基可以进一步稀释使用)；5）10× running buffer...
蛋白质免疫印迹实验的基本原理是将蛋白质通过电泳分离后，转移至固相载体上，然后利用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过显色反应或其他检测手段揭示目标蛋白质的存在和相对含量。二、关键步骤 1. 样品准备：蛋白质提取：从细胞或组织中提取蛋白质，通常使用含有去污剂和蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液。蛋白质定量：使用...
血清:血清如胎牛血清FBS含有大量的蛋白质,可以用于封闭,但是容易产生非特异性背景信号,在WB实验中血清一般用的较少,它更多地应用于免疫组化和免疫荧光实验中样本的封闭。 鱼皮明胶:明胶是胶原蛋白的产物,从冷水鱼皮肤中提取出来的明胶即使在低温情况下也不会凝固,通常使用浓度为0.1-5 % (w/v)。鱼胶含有内源生物...
WB操作步骤包括蛋白提取，含量测定，SDS-PAGE电泳，免疫反应，化学发光，凝胶图像分析。Western Blot 实验操作指南 1.蛋白样本的制备 （1）样本的处理 组织样本处理：取待测组织样本，用预冷的PBS洗去组织表面血液及内 部杂物。称重剪碎，加入适量RIPA裂解液混合物（ 1mL的RIPA裂 解液中加入10μL PMSF）进行匀浆...
1、对蛋白样品进行定量以及配制上样量(包括marker直接20μl),将一抗复温。... 3 2、安装跑胶装置,去除梳子,上样,设置参数(根据目的蛋白大小确定):... 3 3、电转膜:... 3 4、免疫杂交反应... 3 第三天:... 3 5、显影(1cm2膜使用0.1mlHPR发光液)... 3 ...