7.去除一抗,PBS 润洗 3 次,每次 5 min,摇床轻摇。 8.弃 PBS,加入1/0.5/0.25 ml/孔稀释的荧光二抗,室温避光孵育 40 min,摇床轻摇。 9.回收荧光二抗,PBS润洗 3 次,每次 5 min,摇床轻摇。 10.滴加 DAPI(200/100/50ul/孔)避光孵育 5 min,PBS 润洗 4 次,每次 5 min,洗去多余的 DAPI。 用滤纸吸...
滴加荧光二抗以覆盖整个组织为宜,放入暗盒内避光室温孵育1h(注:此后所有步骤均需避光操作),孵育结束,用PBS缓冲液洗涤3次,每次5 min。 13.DAPI染色 采用DAPI染液室温避光染色10 min,用PBS洗涤3次,每次5 min。轻轻蘸干水分,滴加抗荧光衰减封片剂,盖上盖玻片。 14.观察 在荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察目的蛋白的...
(6) 二抗结合。间接免疫荧光需要使用二抗。室温避光孵育1h.PBST漂洗3次,每次冲洗5min后,再用蒸馏水漂洗一次。 (7) 封片及检测。滴加封片剂一滴,封片,荧光显微镜检查。 (一)细胞准备 用于免疫荧光实验的细胞可以是直接生长在盖玻片上的贴壁细胞,也可以是经过离心后涂片的悬浮细胞或者是将取自体内的组织细胞悬液离...
4.倒出二抗溶液,用PBS 避光洗涤细胞3 次,每次5 分钟。 多色染色(可选步骤) 要检测同一个样品中两种或多种抗原的共同分布情况,需要使用双重免疫荧光流程。该流程可在混合物中同时进行检测,也可逐个抗原依次进行检测。 确保抗体来源于不同物种并且这些抗体有相应的二抗。例如,抗抗原 A 的兔抗体和抗抗 原B 的鼠...
免疫荧光实验操作步骤：一、细胞准备：对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。二、固定和透化 1. 在...
免疫荧光免疫荧光实验免疫荧光染色生物实验科研试剂 写下你的评论... 暂无评论相关推荐 10:17 传奇黑客被判175年,只因自己撕烂了美国伪善的面具 星辰趣味屋 · 2000 次播放 2:00 打隧道遇到了一个巨大溶洞,该怎么处理? #基建狂魔 #隧道 元元· 1996 次播放 6:16 绝境中的生存游戏,每一步都是死亡边缘《极限...
免疫荧光(IF)是一种基于抗原-抗体特异性反应,通过荧光标记来检测和定位细胞或组织中特定抗原(或抗体)的高灵敏度技术。此技术不仅在生物医学研究领域有着广泛的应用,还在临床诊断中扮演着重要角色。 基本原理与操作步骤 标记过程:在这一步骤中,选择适当的荧光色素至关重要,因为它必须既不影响抗原-抗体的活性,也要有...
免疫荧光|文献解读+实验步骤+PS作图免疫荧光(IF)是最常见的免疫学、生物化学、细胞生物学的一项技术,通过不同抗体分子与示踪剂的结合,我们能很清晰的看出目的蛋白在细胞内的表达情况。 本条笔记从文献解读到实验步骤再到最终用photosh - poppy(读博版)于20240629发
免疫荧光(IF)实验操作步骤及详细说明 一、试剂和溶液 10X PBS:80g NaCl,2g KCl, 14.4g Na2HPO4和2.4g KH2PO4加1L纯水,调pH至7.4洗涤液:1× PBS:纯水稀释10X PBS;1× PBST:含0.05% Tween-20的1×PBS固定液:4%多聚甲醛:4g多聚甲醛溶于100ml PBS通透液:0.1% triton-100封闭液:PBS配制的3% BSA抗体...
组织免疫荧光(IF)是一种使用荧光标记的抗体来检测组织切片中特定蛋白的存在和定位的技术。这种方法在细胞生物学、分子生物学和病理诊断中广泛应用。 实验步骤 步骤一:组织切片准备 将组织样本进行石蜡包埋,切成4-5微米厚的切片,贴在处理过的载玻片上。