原理:Western Blot(蛋白质印迹或免疫印迹)技术,以蛋白质为检测对象,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)将样品蛋白质分离,再转移到固相载体(PVDF尼龙膜或NC膜)上;固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变;然后以固相载体上的蛋白质或多肽...
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是 聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“ 探针” 是抗体,“显色”用标记的...
免疫印迹(Western Blot) 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE 可对蛋白质样品进行分离,转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相载体可以吸附蛋白质,并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的 NC 膜就称为一个印迹(blot),用蛋白...
免疫印迹,又被称为蛋白质印迹(Western blot,WB),是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术,在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离,随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原,与相应的抗体发生免疫反应,接着与酶标记的第二抗体发生反应。最终,通...
一、简介 蛋白免疫印迹(Western Blot,简称WB)是一种能够从细胞或组织提取的复杂蛋白质混合物中检测靶蛋白并对其进行半定量的常用实验技术,还可以鉴定和定量蛋白质中翻译后修饰的氨基酸。与蛋白质科学中其他常用的分析技术(如ELISA、IHC、质谱法和显微镜观察等)相比,W
(教材版)免疫印迹法(Western Blot)是将凝胶电泳与固相免疫结合,把用电泳分区的蛋白质转移至固相载体,再用酶免疫、放射免疫或染色等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量,常用于检测多种病毒的抗体或抗原。 免疫印迹法分三个阶段进行.第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):抗原等蛋白样品...
一、实验原理Western Blot实验的原理是基于抗原-抗体反应的特异性。将样品中的蛋白质进行电泳分离后,转移到膜上,然后与特异性抗体进行孵育,形成抗原-抗体复合物。通过显色反应,可以检测出目标蛋白质的存在及其相对分子量。二、实验步骤1.样品准备:收集待检测的组织或细胞样品,用蛋白提取液提取蛋白质。2.电泳:将...
Western Blot实验原理 蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 实验步骤 1. 样本制备 1)融解RIPA裂解液(RIPA裂解液-细胞/组织裂解液缓冲液),混匀。取适当量的裂解...