(此步骤对膜蛋白提取有较好作用); 5、4 ℃,14000xg离心10min,将上清转移到新的离心管中,即为细胞裂解物; 6、BCA测定浓度。 注意事项: 整个过程需要在冰上操作; IP样本一般建议新鲜制备并立即使用,如有需要可保存在-80 ℃。 2)预纯化 阴性对照的选择: 与IP抗体同源同型(亚型)的抗体:如 Rabbit IgG;Mouse ...
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、原理: 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。
取20μl磁珠加入适当体积的IP裂解液于离心管中,置于垂直摇床上洗涤5min后,将离心管置于磁力架上静置5-10s,吸掉上清(尽量避免碰到磁珠)。 4、裂解液预处理 向细胞裂解液上清或者组织裂解上清中加入1.0μg IgG(与COIP实验用于沉淀的抗体种属来源相同的普通IgG)和20μl磁珠(使用前充分混匀),4℃摇转孵育30min。
免疫共沉淀Co-IP实验步骤 Co-IP实验步骤 一、制备细胞样品 1.10cm盘细胞用PBS清洗两次,加入1mL RIPA裂解液和10μL PMSF (100mM稀释至1mM); 2.充分混匀吹打后,冰上裂解4h,充分吹打吸入1.5mL EP管中, -80℃保存; 3.取出样品,1200rpm离心10min,取上清弃沉淀,测定蛋白浓度。 二、Co-IP,拉出蛋白 1.每管...
免疫共沉淀(CO-IP)超详细步骤分解。👩🔬今天给大家分享一个案例:利用烟草瞬时表达系统检测蛋白间相互作用的Co-IP实验流程一、烟草样品准备1. 提前1天将4周龄烟草小苗移入黑暗条件培养。2. 转化当天恢复光照,保证烟草状态良好。二、瞬时表达载体制备1. 分别将两种融合标签(诱饵和捕获)的质粒转入农杆菌,28°...
6.形成磁珠-抗体X-蛋白X-蛋白Y复合物:磁珠清洗(重复步骤3),每个样品加20μl磁珠,手动晃匀(切忌涡旋,此时抗体抗原已结合涡旋会使其断裂),4C旋转仪过夜。 第二天: 7.洗去非特异性结合的蛋白:瞬离,放磁力架上2min后弃液体,各样品加IP裂解液(含0.5% Tween20)500μl,手动晃匀,放旋转仪上5min,瞬离,放磁力...
Co-IP实验步骤 一、制备细胞样品 1.10cm盘细胞用PBS清洗两次,加入1mL RIPA裂解液和10μLPMSF(100mM稀释至1mM); 2.充分混匀吹打后,冰上裂解4h,充分吹打吸入1.5mL EP管中, -80℃保存; 3.取出样品,1200rpm离心10min,取上清弃沉淀,测定蛋白浓度。 二、Co-IP,拉出蛋白 1.每管取出少量蛋白样(15~30μL)...
🔬 免疫共沉淀(Co-IP)简介: 免疫共沉淀是一种利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应来研究蛋白质间相互作用的方法。🔍 基本原理: 在细胞裂解液中加入抗原特异性抗体,通过免疫沉淀反应形成免疫复合物。经过纯化、洗脱后,可以通过SDS-PAGE电泳、Western blot或质谱鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。🌈...
Co-IP(免疫共沉淀,co-inmunoprecipitation)是经典的利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体的一项技术,能够特异性富集所研究的目的蛋白。 免疫共沉淀Co-IP实验步骤 细胞转染 1.铺细胞,转染细胞。本次转染的两个蛋白分别带有FLAG和HA标签。 裂解细胞 2.去除培养基,PBS吹下细胞,离心去上清。将细胞沉淀转移...
第二讲:免疫共沉淀(co-IP)实验技术流程及常见问题应对 1.2万 3 9:46 App 研究蛋白泛素化的方法:离体泛素化实验/IP+泛素化检测/MG132处理/CHX处理 7395 -- 9:30 App CHIP实验 | 染色质免疫共沉淀实验操作流程图解及原理解说 2556 -- 9:10 App 生物学小白不容错过~IP免疫共沉淀实验全流程之(一)保姆级...