5, 预清洗裂解物:向 1 mL 裂解物中加入 50 μL 来自相同物种和同亚型的非目标抗体作为免疫沉淀抗体,在冰上孵育 1 h。 6, 4 °C, 5000 g 离心 10 min 弃去微珠沉淀物,保存上清液进行免疫沉淀。 7, 抗体孵育:向微量离心管中加入约 70～100 µL 的蛋白质 A 或 G,加入 10 µL 一抗 (需根据抗...
单一免疫共沉淀是指将抗体与目标蛋白质结合后,直接进行质谱分析。而串联免疫共沉淀则是在单一免疫共沉淀的基础上,将沉淀物再次进行免疫沉淀和质谱分析,以筛选出更加特异的相互作用伴侣。 二、步骤 IP-MS的实验步骤如下: 1.选择合适的抗体:选择与目标蛋白质结合的特异性抗体,并进行验证。 2.免疫沉淀:将抗体与混合...
5.预清洗裂解物:向 1 mL 裂解物中加入 50 μL 来自相同物种和同亚型的非目标抗体作为免疫沉淀抗体,在冰上孵育 1 h。 6.4 °C, 5000 g 离心 10 min 弃去微珠沉淀物,保存上清液进行免疫沉淀。 7.抗体孵育:向微量离心管中加入约 70～100 µL 的蛋白质 A 或 G,加...
1. 免疫共沉淀-质谱技术的原理 免疫共沉淀-质谱技术是一种将免疫沉淀与质谱分析相结合的方法。其基本原理是利用特异性抗体对目标蛋白进行识别并与其结合,然后通过沉淀抗体-蛋白复合物来富集目标蛋白及其相互作用的蛋白分子。接下来,通过质谱分析技术,可以鉴定和定量免疫共沉淀样品中的蛋白质,进而揭示蛋白质相互作用网络。
该技术结合了免疫沉淀和质谱分析,能够鉴定蛋白质相互作用和识别蛋白质复合物的成员,广泛应用于生命科学、疾病诊断和治疗等领域。 一、IP-MS 的基本原理 IP-MS 技术的基本原理是利用特异性抗体将目标蛋白质从混合物中沉淀下来,然后用质谱分析鉴定沉淀物中的蛋白质。该技术主要包括以下步骤: 1. 样品制备:将需要分析...
IP-MS技术是将免疫共沉淀和质谱技术结合起来的一种方法,它可以用于鉴定蛋白质相互作用和蛋白质复合物的组成。IP-MS技术的基本步骤如下:首先,使用抗体将目标蛋白质与其相互作用的蛋白质共沉淀下来;然后,将共沉淀物进行质谱分析,得到蛋白质的质量和荷质比信息;最后,通过数据解析,确定蛋白质相互作用和复合物的组成。 IP...
免疫共沉淀质谱(Immunoprecipitation Mass Spectrometry, IP-MS)是一种用于鉴定蛋白质相互作用的实验手段,它结合了免疫沉淀和质谱分析技术。 一、样品准备 首先,从细胞或组织中提取蛋白质。这通常涉及到使用蛋白质裂解缓冲液(比如 RIPA 缓冲液)破裂细胞,并通过离心来分离蛋白质。
2. 免疫共沉淀-质谱技术的步骤 步骤一：抗体结合 在免疫共沉淀-质谱技术中，首先需要选用与目标蛋白特异性结合的抗体。这些抗体可以事先与磁珠或琼脂糖等固相载体结合，形成免疫亲和柱。步骤二：细胞裂解和免疫沉淀 细胞裂解是将样品中的蛋白质释放出来的关键步骤。细胞裂解液与免疫亲和柱结合，使目标蛋白与抗体结合...
免疫共沉淀质谱是利用抗体对目标蛋白进行免疫沉淀,然后通过质谱技术分析沉淀物中的蛋白质组成,以鉴定目标蛋白的交互伙伴。该技术可以分为两个步骤:免疫共沉淀和质谱分析。 免疫共沉淀是将抗体与目标蛋白结合,形成抗原-抗体复合物。然后通过抗体的特异性,将该复合物沉淀下来,同时也将与之结合的蛋白质一同沉淀下来。这样...
IP-MS技术包括三个主要步骤:1)特异性免疫共沉淀;2)共沉淀物的鉴定;3)蛋白质互作网络的建立。 1、特异性免疫共沉淀 免疫共沉淀是一种用于研究蛋白质之间相互作用的常用技术,它能够特异性地捕获细胞内的蛋白质或多肽结合到表位抗原的抗体上。这一步需要选择有特异性的抗体,并将抗体与细胞内的抗原结合,使其能够特...