③将所有细胞刮下，收集到离心管，置于冰上。④冰浴中对样品用超声处理3次，每次5秒钟。（此步骤对...
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤 免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤 一、原理: 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质...
免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 免疫共沉淀(Co-IP)详细步骤教程 一、 原理:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞… Frdbio重组蛋白与抗体研发平台 免疫共沉淀(Co-IP)详细操作流程 岚solo发表于细胞分离 免疫共沉淀...
图1:标准 Co-IP 协议中的步骤。 1. 裂解你的细胞 在这里,您轻轻地打开您的细胞,使您的蛋白质接触到抗体。 裂解方法在 Co-IP 中很重要。 非去污剂、低盐裂解缓冲液是可溶性蛋白质 Co-IP 的流行选择。 这种裂解最不可能干扰任何蛋白质相互作用。
🔬 免疫共沉淀(Co-IP)简介: 免疫共沉淀是一种利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应来研究蛋白质间相互作用的方法。🔍 基本原理: 在细胞裂解液中加入抗原特异性抗体,通过免疫沉淀反应形成免疫复合物。经过纯化、洗脱后,可以通过SDS-PAGE电泳、Western blot或质谱鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。🌈...
建议先做过表达CO-IP作为对照。Detaibio提供免疫共沉淀CO-IP检测服务，可对两种已知蛋白是否存在相互作用进行验证，也可以验证在总蛋白中是否含有与已知蛋白相互作用的未知蛋白。通过SDS-PAGE银染，结合Western Blot及液相质谱等对两种蛋白之间是否存在相互作用进行定性分析。
免疫共沉淀Co-IP实验步骤 Co-IP实验步骤 一、制备细胞样品 1.10cm盘细胞用PBS清洗两次,加入1mL RIPA裂解液和10μL PMSF (100mM稀释至1mM); 2.充分混匀吹打后,冰上裂解4h,充分吹打吸入1.5mL EP管中, -80℃保存; 3.取出样品,1200rpm离心10min,取上清弃沉淀,测定蛋白浓度。 二、Co-IP,拉出蛋白 1.每管...
Co-IP实验步骤 一、制备细胞样品 1.10cm盘细胞用PBS清洗两次,加入1mL RIPA裂解液和10μLPMSF(100mM稀释至1mM); 2.充分混匀吹打后,冰上裂解4h,充分吹打吸入1.5mL EP管中, -80℃保存; 3.取出样品,1200rpm离心10min,取上清弃沉淀,测定蛋白浓度。 二、Co-IP,拉出蛋白 1.每管取出少量蛋白样(15~30μL)...
免疫共沉淀(Co-IP实验)步骤 1 用磷酸盐缓冲液洗 30块 10 cm培养板上的适宜细胞。 刮去每块板上的细胞到 1 ml冰冷的 EBC裂解缓冲液中。 2 将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中, 在微量离心机上 4 ℃以最大速度离心 15 min。 3 收集上清 (约 30 ml)并加入 30 μg的适当抗体, 4℃摇动免疫沉淀物 1...