组蛋白修饰质谱分析的核心流程分为样本处理、酶解消化、质谱检测和数据分析四个阶段。样本处理需从细胞或组织中提取完整染色质,通过酸解或盐析法分离组蛋白,避免使用强变性剂破坏修饰结构。酶解消化阶段常采用胰蛋白酶或Glu-C蛋白酶将组蛋白切割为肽段,切割位点需避开常见修饰区域以确保肽段携带完整修饰信息。质谱检测环...
1、质谱质量分析（MS）：MS通过测量分子的质量来确定其质子化的分子离子（m/z值）。对于组蛋白修饰的研究，质谱质量分析可以用于确定修饰的类型和位置，因为不同的修饰会引入不同的质荷比。2、串联质谱分析（MS/MS）：MS/MS进一步分解分子离子，提供更多的信息，包括修饰的具体位置和丰度。这是特别重要的，因为一...
乙酰化修饰是一种常见的蛋白质修饰方式,通过在蛋白质上添加乙酰基(CH3CO-)来改变蛋白质的功能和稳定性。 乙酰化修饰质谱通常包括以下步骤: 1. 样品制备:将待分析的蛋白质样品进行适当的处理和纯化,以去除其他干扰物质,并保持乙酰化修饰的完整性。 2. 消化酶切:将样品中的蛋白质使用适当的酶进行消化,通常使用胰...
通过使用质谱数据库和搜索算法,可以准确地鉴定肽段的氨基酸序列和修饰位点。 百泰派克生物科技——生物制品表征,多组学生物质谱检测优质服务商 相关服务 组蛋白翻译后修饰分析 其他相关服务 特色项目 一、蛋白测序 百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap FusionLumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列...
蛋白质翻译后修饰分析的主要内容就是鉴定其修饰类型、修饰的氨基酸位点以及修饰官能团的含量等。质谱技术作为蛋白质组学先进的研究手段，也是PTM鉴定的强有力工具。通过液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术可以对蛋白质翻译后修饰进行定性和定量鉴定。由于正常生理状态下翻译后修饰蛋白质的丰度较低，影响质谱检测的灵敏度，...
质谱数据解析是另一个关键难点。市售软件虽然能自动匹配修饰位点,但对低丰度修饰的识别准确率不高。人工验证时发现,软件可能将同位素峰误判为修饰峰。某次泛素化分析中,算法将+114.1Da的质量偏移识别为泛素化修饰,实际是样本处理过程中引入的碘乙酰胺加合物。这种情况需要结合保留时间、二级谱图碎片离子等信息综合判断。
质谱(MS)提供了一种强大的工具来分析蛋白质的翻译后修饰,特别是泛素化修饰。 图1.泛素化修饰研究路线 一、泛素化修饰的特性 泛素是一个在所有真核生物中均有的小蛋白,由76个氨基酸组成,分子量约为8.6 kDa。泛素通过其C端的甘氨酸残基与目标蛋白的赖氨酸残基形成一个稳定的异肽键,这个过程被称为泛素化。通过...
甲基化是一种重要的蛋白质修饰,涉及到甲基基团的添加或去除。这种修饰在细胞中对基因表达和其他生物学过程起着关键作用。 蛋白质甲基化修饰质谱通常包括以下步骤: 1.样品制备:从生物样品中提取蛋白质,并进行适当的预处理步骤,如蛋白质还原、碱解、酸解等,以获得适合进行质谱分析的样品。 2.蛋白质消化:使用特定的...
质谱检测是分析蛋白质翻译后修饰（PTM）的重要工具。翻译后修饰是指在蛋白质合成后发生的各种化学改变，这些改变对蛋白质的功能、定位和活性有重大影响。常见的翻译后修饰包括磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。在质谱分析中，蛋白质样本首先通过酶切被分解成较短的肽段。这些肽段被送入质谱仪，在其中被电离成带...