免疫共沉淀实验流程为:收集蛋白样品—诱饵蛋白抗体沉淀诱饵蛋白—SDS-PAGE分离蛋白—WB检测是否存在靶蛋白。详细实验操作流程。 免疫共沉淀结果的真实性 验证免疫共沉淀试验结果的真实性主要从下面几点考虑:(1)抗原的沉淀是由本身抗体的结合引起的,单克隆抗体不存在此问题,故建议使用单克隆抗体。(2)确保抗体的特异性,...
如果Co-IP验证出两个蛋白质相互作用,但其他验证方式却没有检测到这种互作,可能有以下几个原因:首先,Co-IP可能存在假阳性结果,即非特异性结合的蛋白被一同沉淀下来。其次,其他验证方式可能受到技术限制,无法检测到低丰度的相互作用。此外,不同的实验条件和细胞环境可能导致不同的结果。
免疫共沉淀(Co-IP)技术作为一种重要的蛋白质相互作用研究方法,在生物药物领域取得了突破性进展。通过Co-IP技术,研究人员可以深入了解蛋白质之间的相互作用关系,揭示细胞的功能和疾病的机制。在生物药物研发中,Co-IP技术可以用于鉴定潜在药物靶点、评估药物的特异性和亲和力,以及研究生物药物的相互作用机制和稳定性。然而...
免疫共沉淀在实际中应用可广泛了,比如说在研究某种疾病相关的信号通路的时候,如果我们怀疑两种蛋白在这个疾病的发病机制中有相互协作的关系,就可以用这个方法来验证。像在肿瘤研究中,很多蛋白之间通过相互作用来影响癌细胞的增殖、迁移等过程,免疫共沉淀就能帮我们确定哪些蛋白是互相勾结(相互作用)的坏家伙。 不过老实说...
1.抗体选择和免疫沉淀 免疫沉淀接质谱技术的第一步是选择具有高特异性的抗体,用于捕获目标蛋白质。抗体通过结合目标蛋白质上的特异性抗原表位,形成免疫复合物。 2.洗涤和去除非特异性结合物 为了获得高质量的结果,必须对免疫复合物进行洗涤,去除非特异性结合的蛋白质和杂质。这样可以减少后续质谱分析的干扰因素,提高检...
免疫共沉淀Co-IP是一种通过特异性抗体识别和沉淀感兴趣蛋白质的技术。其基本原理是在细胞提取物中，使用特定的抗体与目标蛋白质结合，形成免疫复合物，然后利用沉淀剂将免疫复合物沉淀下来。最后，经过洗涤和蛋白质分离，可以进一步分析和研究沉淀的蛋白质。在免疫共沉淀Co-IP实验中，需要进行一系列的步骤。首先，提取...
IP:即指免疫沉淀(immunoprecipitation),用相应的抗体来纯化富集目的蛋白,例如图中“IP: Flag”的意思是用Flag标签抗体磁珠去拉Flag,与Flag融合表达的蛋白为诱饵蛋白,此时与该融合蛋白相互作用的其他蛋白都会因此被沉淀下来。 IB:即指免疫印迹(immunoblotting)或western blot(WB),用来检测目的蛋白的存在与否,例如图中“...
免疫共沉淀技术在研究蛋白质相互作用方面的优点:相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点:可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间...
免疫共沉淀效果 通常很好,但有时非特异性相互作用会带来假阳性 有抗体的亲和力决定和抗原表位是否被相互作用蛋白遮蔽决定(极佳或极弱) 极佳(由于选择可以成功进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群) 染色质免疫沉淀效果 通常很好,但有时非特异性相互作用会带来假阳性 由抗体的亲和力决定和抗原表位是否被遮蔽或者...
在做Nrf2和Keap1的Co-IP,但是重复多次仍然无明显的相互作用（两者均过表达，用Keap1拉的Nrf2,最后树脂...