5. **GC含量与二级结构**:高GC区域难解链,添加剂如DMSO可降低DNA稳定性。 6. **反应体系优化**:Mg²⁺浓度过高影响保真度,需梯度优化;dNTP浓度不足导致合成停滞,需适当补充。温度循环中的变性/退火时间可能需调整以适应长片段。 通过上述针对性调整,可显著提升长片段PCR的成功率。反馈 收藏
造成常规PCR扩增长片段DNA效果不好的原因有以下几点:①常规PCR反应中应用的耐热DNA聚合酶(如Taq酶)缺乏3→5核酸外切酶活性,不具备很好的校读功能,因而具有较高频率的错误碱基的掺入,不能有效扩增长片段DNA;②较长的模板DNA容易形成高级结构,使DNA聚合酶难以与模板结合,也就实现不了其聚合功能;③较长的模板DNA变性...
经过实践,应用文章提到的特殊5'端引物序列与相应的PCR程序,成功扩增出了10Kb大小的片段,并经过测序验证。PCR酶为KOD Fx Neo。 此外,在PCR的过程中,作者提供的PCR程序并非全都能成功,我在GC含量分布图的基础上直接参考GC含量分布设计扩增时的温度,也全都成功了,所以大家不必拘泥于作者提供的4个模板程序,可以自由发挥。
荧光定量PCR不仅能够精确定量PCR产物，还可以实时监测整个扩增过程，包括扩增效率、溶解温度等，而普通PCR无法实现这些功能。普通PCR需要通过电泳来检测产物分子量大小，而荧光定量PCR则可以直接定量分析，无需电泳。PCR技术最初用于扩增特定的PCR片段，用于克隆、测序等实验，后来也用于检测样本中特定PCR片段的存...
Qiagen长片段PCR扩增试剂盒206401 英文名称: Qiagen长片段PCR扩增试剂盒206401 总访问: 1682 国产/进口: 进口 半年访问: 107 产地/品牌: Qiagen 产品类别: 其他生物试剂 规格: 206401 最后更新: 2025-5-14 货号: 206401 CAS 号: 20T 参考报价: 842.00 立即询价 电话咨询 ...
D. STI PCR(PS引物和nested TIC)扩增A中的片段,扩增特异高效。 E. 一轮STI PCR扩增超长基因组DNA片段。 F. 对于一些特别长的基因组DNA片段(比如> ~30 kb),可以在STI PCR扩增一轮产物之后,再用巢式PCR的方法(引物无需PS,反应条件仍旧nested TIC)扩增第二轮。为了...
PCR 技术 是一项最基本的分子生物学技术,在分子生物学、生物技术、合成生物学、诊断、检测、鉴定和法医分析等领域受到广泛地应用。其中长片段PCR主要应用在大片段基因功能研究、多基因簇研究,基因组结构变异分析、大片段合成(比如染色体合成)、高通量测序等多方面。
长片段PCR扩增试剂盒可以扩增大于或等于5 kb的片段。本试剂盒中的酶是Taq DNA 酶和具有校对活性的热稳定DNA聚合酶特殊组合而成。高保真,以病毒基因组DNA为模板能够扩增40 kb的PCR产物;以人类基因DNA为模板能够扩增20 kb的PCR产物。此外,特别配制的长PCR缓冲液可保护DNA在长热循环中免受损伤。本产品推荐的反应体系...
2× Hieff®Ultra-Long PCR Master Mix含有经过配体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase,融合3’-5’校正活性因子以及优化的缓冲体系,能够扩增长达25 kb的基因组片段、14 kb的cDNA基因序列以及40 kb的λDNA片段。Mix中已包含扩增所需的dNTP、Mg2+,使用时只需加入引物和模板即可进行PCR反应,避免了加样过程产生的各种...
Long-Range PCR定义 长距离PCR这个概念是相对于标准PCR来说的。在一个标准PCR反应条件下，PCR扩增片段长度一般在1~2kb，这个长度对许多常规DNA分子操作要求来说已经足够。（J.Sambrook，2013）。但对扩增某些哺乳动物较大的基因，甚至是中等大小的基因，或者平均长度的全长cDNA，标准PCR扩增的长度远未达到实验要求。...