酵母感受态制备工作液可放室温待用。 五、用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次(对10 mL酵母则需要5 mL酵母感受态制备工作液)。即混合后振荡1分钟,室温3 000 rpm离心3分钟,去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。 六、再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体(对10 mL酵母,则需要...
1. 在转化实验的两天前,于YPDA培养基的平皿上活化酵母菌株。 2. 转化前一天,挑取活化的酵母细胞(单克隆)于YPDA液体培养基中,30°C,200 rpm培养过夜。 3. 将培养过夜的酵母细胞液按1:3的比例转接与新的YPDA液体培养基中,于30°C摇床内,200 rpm培养4 h。 4. 3 000 g 离心 5分钟收集酵母细胞,用0.5倍...
(7)将混匀的感受态细胞和线性化质粒加入预冷的电转杯中,电压1.5 KV,电击5 msec; (8)随后迅速加入1 mL冰冷的1 M山梨醇溶液,用移液枪将电转杯中菌悬液吸出转移至2 mL离心管,30℃孵育1.5 h; (9)将菌液涂布到YPDZ平板上,30℃条件下培养2-3天,观察菌落生长情况。
酿酒酵母的电转感受态制备方法和电转化方法 (1)接种工业酒精酵母至30 mL液体YEPD培养基,30度培养12 h; (2)取培养物以1%的接种量转接到30 mL新鲜YEPD液体培养基中,30度培养8 h,使菌体达到同步生长状态; (3)将酵母培养物置于冰上放置30 min后,6,000 r/min离心5 min收集菌体; (4)弃上清,加入已预冷的1...
3、毕氏酵母电转化法 (1)E.coli TOP10F’感受态细胞的制备 取10ul TOP10F’菌液，接种于200ml LB液体培养基中活化培养，37℃，200 rpm，16～18小时。取100ul菌液接种于200ml液体LB培养基中。 37℃，200 rpm，培养16～18小时。 灭菌500 ml离心管，4℃，4000 rpm，20 min。得菌体沉淀...
1）接种SMD1168单菌落至5ml YPD中，250rpm，30℃过夜培养；2）取50μL菌液接至50ml YPD三角瓶中，30...
酵母感受态制备方法本专题涉及酵母感受态制备方法的标准有35条。国际标准分类中,酵母感受态制备方法涉及到香料和调料、食品添加剂、粘合剂和胶粘产品、食品试验和分析的一般方法、饲料、生物学、植物学、动物学、食品综合、医学科学和保健装置综合、微生物学、烟草、烟草制品和烟草工业设备、感官分析、(没有标题)、厨房...
本发明涉及一种用于酿酒酵母电转感受态细胞的制备的重悬液及酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法。背景技术::经过处理后可以摄取外源dna,处于这种状态的细胞称为“感受态细胞”。在微生物学、分子生物学、基因工程等研究领域,经常要使用各种感受态细胞进行dna的转化操作。感受态细胞的制备是分子生物学研究中的一个重要环节,...
思路如下:根据本发明一种典型的实施方式,一种毕赤酵母感受态细胞的制备方法,所述方法包括:接种毕赤酵母进行第一培养,后转接进行第二培养,得到第一菌液;将所述第一菌液进行第三培养,得到第二菌液;将所述第二菌液依次用细胞渗透压保护液、细胞膜透性增强液、细胞稳定液和细胞dna保护液进行重悬活化,得到感受态细胞...