1. 将两个表达靶蛋白的质粒分别转化到酵母菌株中。 2. 检测转化结果,筛选出表达抗性的酵母菌株。 二、对照实验 1. 将表达蛋白与空质粒转化到同一酵母菌株中作为对照组。 2. 筛选出对照组中没有杂交的克隆。 三、预测蛋白的筛选 1. 将表达的靶蛋白与预测蛋白的质粒转化到已经筛选完成的酵母菌株中。 2...
2.1酵母转化中DNA 混合液的配制 在制备酵母感受态的过程中配制下面的DNA 转化混合液(1×): 2.2酵母感受态细胞的制备以及共转化 下面是所需用量为10 个转化实验的酵母感受态细胞的制备。 (1) 挑取平板上AH109 酵母细胞的单个克隆至5 ml YPD 培养基中,30℃ 摇床振摇培养过夜(可加入2 mg/ml 的Adenine 75 μl ...
10. 准备转化的质粒:将1 μg质粒DNA(共转化时,两种质粒各为1 μg)及2 μL 10 mg/mL的变性鲑精DNA加入2 mL离心管中,充分混匀,总体积不应超过10 μL。 11. 加入100 μL酵母感受态细胞并轻轻混匀,30℃,200 rpm,培养30 min(可缩短或取消)。 12. 加入600 μL PEG/LiAC溶液(40% PEG,1×LiAC,1×...
2.1酵母转化中DNA 混合液的配制 在制备酵母感受态的过程中配制下面的DNA 转化混合液(1×): 2.2酵母感受态细胞的制备以及共转化 下面是所需用量为10 个转化实验的酵母感受态细胞的制备。 (1) 挑取平板上AH109 酵母细胞的单个克隆至5 ml YPD 培养基中,30℃ 摇床振摇培养过夜(可加入2 mg/ml 的Adenine 75 μl ...