当然,这还是会有点浪费时间的,我在这里就直接将扩增好的单克隆菌液直接涂布在两者板上-TRP和-TRP/-HIS,直接进行筛选同时如果有全都生长的很好,且出现蓝色(含X-α-gal时),则能说明转化成功且有激活作用。(这里很关键的一点是,你必须要加3-AT,否则出现假阳性的结果可能性相当大,我在这次实验中就出现了假阳性...
转录激活实验是一种用来研究基因转录调控的实验方法。以下是一个常见的转录激活实验步骤的简要描述,具体操作会依据实验设计和研究目的有所不同: 1.细胞培养:选择合适的细胞系,如人类细胞株HEK293、HeLa等,并进行细胞培养至适当的密度。 2. DNA构建:设计和构建所需的DNA表达载体,如转录激活元件的启动子报告基因融合...
[gf]2009[/gf]接着,他们利用转录组分析和荧光定量PCR等实验,鉴定出一个1R-MYB类型的转录因子AceMYBS1。为了揭示AceGGP3受AceMYBS1调控的机制,作者利用酵母单杂交,双荧光素酶报告基因检测和EMSA等实验共同揭示了AceMYBS1可直接结合到AceGGP3的启动子上,激活AceGGP3基因的转录(图9)。最后,为了进一步研究AceMYBS...
实验原理：小鼠信号转导子和转录激活子1(STAT1)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒采用间接酶联免疫吸附法测定标本中小鼠STAT1蛋白的含量。首先，将特异性抗体包被在酶标板上，再将待测标本加入孔中，标本中的小鼠STAT1蛋白与已包被的特异性抗体结合，形成抗体-抗原复合物。经过洗涤后，去除未结合的成分，最后加入酶标记的...
博士为共同通讯作者在《Nucleic Acids Research》杂志发表了题为“CHD6 promotes broad nucleosome eviction for transcriptional activation in prostate cancer cells”的研究论文,该研究通过对CHD6的ChIP-seq、MNase-seq和RNA-seq等实验揭示...
沉默转录激活因子 4 抑制脑出血后神经元坏死性凋亡的体外实验 背景:脑出血介导的神经元坏死性凋亡是继发性脑损伤的重要原因。转录激活因子4(activating transcription factor 4,ATF4)是转录激活因子家族成员之一,在脑出血后的继发性脑损伤...
作者利用酵母实验系统分析了大豆NAC家族3个基因GmNAC11、GmNAC20和GmNAC35的转录激活能力。首先,将3个基因的编码区分别融合到GAL4的DNA结合区域,生成pBD-GmNAC融合质粒;然后,将质粒转化到酵母株YRG-2中,并检测其在GAL4上游激活序列激活转录的能力,以及在无组氨酸培养基中促进酵母生长的能力,以含有pGAL4和pBD载体的...
二、操作步骤1. 准备试剂和材料：猴转录激活因子-5(ATF-5)酶联免疫试剂盒、酶标板、洗涤液、样本稀释液、移液器、实验服、手套、口罩、记录笔等。2. 样本处理：根据试剂盒说明书的要求，将待测样本进行适当的稀释，并加入等量的样本稀释液。3. 加样：使用移液器将稀释后的样本加入到酶标板上的相应孔中，并...
转录激活是指转录因子结合到基因启动子上,促进RNA聚合酶的结合和启动转录的过程。而酵母转录激活实验即通过人工构建的实验体系,模拟和研究这一过程。 在酵母转录激活实验中,首先需要选取感兴趣的基因和调控因子。基因是生物体内蛋白质合成的基本遗传单位,而转录因子则是一类能够与DNA特定序列结合的蛋白质,能够调控基因的...
因此,我们推测CCL28可能受到转录因子SPDEF的调节,从而影响巨噬细胞浸润并参与CRC细胞的免疫逃逸。 SPDEF 转录激活 CCL28 表达 为了进一步研究 SPDEF 是否参与 CCL28 的转录调控,我们在 CCL28 启动子中选择了两个假定的 SPDEF 结合位点 P1-P2并进行了 ChIP 实验。ChIP-qPCR 结果表明,SPDEF 在 CCL28 启动子区域的...