1.正规做法：将上一步的菌液涂布在含有相应抗生素的固体培养基上。培养过夜，挑选长出的单克隆菌落进行后续摇菌。2.懒人做法：直接将上一步的菌液接种到含有抗生素的LB液体培养基中。在37°C的摇床上培养过夜，依靠液体LB培养基里的液体筛选正确转化的菌，一般不会有问题。如果后续提取质粒浓度较低或者细胞实验效果...
热激法转化 实验试剂及仪器 DH5α感受态细胞,LB液体培养基,移液枪,离心管,无菌培养皿,恒温水浴锅,离心机,超净工作台等。 操作方法 1) 从-80 ℃冰箱中取100 μL感受态细胞悬液,置于冰上融化; 2) 加入20 ng质粒DNA(体积不超过5 μL),轻轻摇匀,冰上放置30分钟; 3) 42 ℃水浴中热击60- 90 sec,热激...
2.体外转化实验的过渡实验——含有抗R血清的培养基 在格里菲斯(1928)和艾弗里(1944)之间,另一些科学家的体外转化实验获得了成功,但是此时体外转化实验所用的S型菌的粗提取液成分复杂,转化效率不高。 艾弗里同事们做了相关的体外转化实验证实了格里...
农杆菌介导的杨树叶片外植体在30日龄时的转化效率高于60和90日龄的杨树叶片外植体[14]。这是因为农杆菌介导的转化效率取决于叶片外植体的表面，因为幼叶表面有更多的结合位点，容易被农杆菌[13]附着。而成熟叶片的表皮细胞较为完整，附着位点数量有限，导致转化效率降低。枸杞幼龄苗（3周龄）叶片外植体的转化效率高于4...
人教版高中生物学旧教材将本实验称为“肺炎双球菌的转化实验”,新教材则标以“肺炎链球菌的转化实验”。实际上,1944年艾弗里发表的文章中采用的名称为“ pneumococcal types”,翻译为“肺炎球菌类型”),因此,“肺炎双球菌”和“肺炎链球菌”指同一种细菌。目前...
实验分组及处理同上，TRIzol 提取细胞后每管加入 200 µL 氯仿，离心 15 min 后吸取 400 µL 上层水相至新的管中；每管加入 400 µL 异 丙醇，离心 10 min，弃上清；加入 l mL 75 % 的乙醇悬浮沉淀后 离心 5 min，弃上清后晾置并加入 50 µL DEPC 水，吹打混匀， 稀释后用紫外分光光度计...
2 转化扩增 3 抽提和鉴定 质粒抽提怎么选? 三、质粒转染及观察 1 细胞培养 2 分组 3 转染 四、RT-PCR/Western Blot 检测其表达 1 RT-PCR ▐ 实时荧光定量 PCR(RT-PCR)检测 EGFP-Parkin mRNA 的表达水平 2 Western Blot ▐ Western Blot 检测Parkin蛋白的表达水平 五、常见实验问题解答 1 如何做好细菌...
将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养,即可筛选出转化子(transformant,即带有异源 DNA分子的受体细胞)。目前常用的感受态细胞制备方法是CaCk法,制备出的感受态细胞暂时不用时,可加入占总体积15%的无菌甘油于一70℃保存(半年),因此CaCl 法使用更广泛。为了提高转化效率,实验中要考虑以下几个重要因素。1.细胞生长状态...
综上所述，原生质体转化实验中细胞在 PEG 转化后全部破裂可能是由 PEG 相关因素、原生质体制备环节、操作过程因素以及细胞自身特性等多方面原因共同导致的。在实际实验中，需要对每个环节进行严格的控制和优化，仔细调整实验条件，以提高原生质体的转化效率并减少细胞破裂的发生。同时，对于实验中出现的问题，应通过细致的...
基因连接转化实验是基因工程中重要的基本操作之一,其原理主要包括以下几个方面: 1. 基因克隆:通过酶切、连接等操作,将目的基因与载体连接起来,构建成重组质粒。 2. 转化:将重组质粒导入宿主细胞,使其在宿主细胞内复制、表达。 3. 筛选:通过选择性培养基和分子生物学方法,筛选出含有目的基因的转化子。 4. 鉴定:...