(三)酶切 (1)将灭菌的200uL PCR 管编号,用微量移液器取5 uL DNA 溶液加入1uL酶切缓冲液,EcoR一酶uL(2u),无菌水补至总体积10uL,用手指轻弹管壁使溶液混匀,使溶游集中在管底。使用限制性内切酶时应尽量减少其离开冰箱的时间,以免活性降低。(2)混匀反应体系后,将离心管置于适当的支持物上(如插在泡沫...
实验二十一质粒DNA的提取、酶切与鉴定 一、质粒DNA的提取 [原理]分离质粒DNA的方法包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离和纯化质粒DNA。 本实验采用碱变性法抽提质粒DNA,是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键断裂,双螺旋结构解开...
质粒dna的提取酶切与鉴定 实验二十一质粒DNA的提取、酶切与鉴定一、质粒DNA的提取[原理]分离质粒DNA的方法包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离和纯化质粒DNA。本实验采用碱变性法抽提质粒DNA,是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA的氢键...
1. DNA 琼脂糖凝胶电泳 ① 琼脂糖凝胶的制备:称取0.6g 琼脂糖,置于三角瓶中,加入50 mL TBE 缓冲液,经沸水浴加热全部融化后,取出摇匀,此为1.2%的琼脂糖凝胶。 ② 胶板的制备:取橡皮膏(宽约1cm)将有机玻璃板的边缘封好,水平放置,将样品槽板垂直立在玻璃板表面。将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液,小心倒入凝...
在制作酶谱、测定序列、制备探针等实验中需要高纯度、高浓度的质粒DNA,为此需要大量提取质粒DNA。大量提取的质粒DNA一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化绝梯度离心法。 (一)、碱法 1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的细菌培养液250ml,4℃下5000g离心15分钟,弃上清,将离心管倒置使上清液全部流尽。
4、循盆固股违庞金彻昂嫌拒实验二十一 质粒DNA的提取、酶切与鉴定一、质粒DNA的提取原理 分离质粒DNA的方法包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离和纯化质粒DNA。 本实验采用碱变性法抽提质粒DNA,是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH高达12.6的碱性条件下,染色体DNA...
1、质粒DN可勺提取与酶切生物化学实验报告质粒DNA的提取与酶切质粒dnA勺提取与酶切质粒DNA的提取与酶切一实验原理碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒 DNA的方法,其基本原理为:当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋 白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒 DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时 留在上清中;...
2、质粒DNA的提取与定量: 3、酶切鉴定: 步骤 实际操作 在一个洁净的1.5ml 的EP管中按顺序依次加入以下以下试剂 试剂 体积(μl) 无菌水 10*M酶切缓冲液Buf R 质粒DNA Hind III (15U/ul) EcoR I (12U/ul) 9.0 2.0 7.0 1.0 1.0 用移液枪轻轻混匀(避免产生气泡),37℃水浴1.5h 4、琼脂糖凝胶电泳:...
质粒DNA提取 质粒的酶切鉴定 (电泳检测下次进行) 质粒质粒(plasmid)(plasmid) 质粒是存在于细菌体内的 一类独立于染色体的自主 复制的遗传成分,在细胞内 它们常以共价闭环的超螺旋 形式存在。 质粒已成为目前最常用的 基因克隆的载体分子。有一 些质粒能携带外源DNA,可 ...
l 学习重点 1. 学习质粒碱裂解提取法的原理和操作。2. 掌握质粒DNA 的酶切和鉴定方法。3. 学习琼脂糖凝胶核酸电泳技术。l 知识要点 1. 质粒:独立于细菌染色体外,能自主复制的遗传因子,可以稳定地遗传细菌的某些性状。天然的质粒都是环状双链DNA ,大小从5kb 到400kb 不等。2. 碱裂解法:质粒DNA 提取...