原理:利用抗原抗体特异性结合,通过电泳分离蛋白质并转移至固相载体,利用抗体进行检测。 步骤:1. 样品制备及蛋白提取;2. SDS-PAGE电泳分离;3. 转膜至PVDF/硝酸纤维素膜;4. 封闭非特异性结合位点;5. 一抗孵育结合目标蛋白;6. 二抗(标记酶或荧光)孵育;7. 显色或化学发光检测信号。 1. **原理判断**:Western blot核...
1、制备上样体系：将蛋白溶液与5×loading buffer以及PBS混合，以调整蛋白上样量至20-50ug的范围。2、进行上样：在电泳槽的最左和最右孔中，加入SDS-PAGE loading buffer，以确保条带平整；随后，在中央或靠近两端的孔中，分别加入3-5ul的蛋白maker作为参照；最后，将制备好的蛋白样品（9ul）加入到相应的孔道中...
蛋白质印迹实验方案(步骤)下图1显示了蛋白质印迹的实验方法。 图1:蛋白质印迹实验步骤概述。蛋白质印迹凝胶在进行蛋白质印迹之前,必须分离样品中的蛋白质。这通常是通过蛋白质电泳实现的,例如十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)或天然PAGE,根据蛋白质的分子量或电荷分离蛋白质。选择的具体分离方法取决于分析...
全自动Digital WB技术显著地缩短了样本检测时间到3小时，直接采集化学发光或荧光信号值，利用数字化信号峰面积来表征蛋白含量，短时间内实现了目的蛋白的可视化精准定量分析。技术特点 Wes全自动蛋白质免疫印迹系统采用革新的Simple Western技术，颠覆30多年传统的Western Blot方法，实现在同一根样品管中完成样品分离、捕获、...
Jess全自动蛋白质表达定量分析系统实现了整个Western过程的全自动化、标准化。 Jess采用先进的毛细管电泳技术,以极低的样本量全自动完成蛋白上样、分离、封闭、抗体孵育、检测和数据分析等所有步骤,可以在 3小时左右完成多达25个样品的蛋白表达定量分析...
④样品中的目的蛋白质含量低或没有目的蛋白质,应增加上样量; ⑤封闭过度,应更换封闭液,缩短封闭时间。 2.没有阳性条带,或者阳性条带比较弱 3.非特异性条带多或位置不准确 ①目的蛋白质被乙酰化、磷酸化、甲基化、烷基化、糖基化,应选择去修饰剂以恢复原有目的蛋白质大小; ...
蛋白质印迹分析.docx,蛋白质印迹分析(Western Blot Analysis) 【实验目的】 了解蛋白质印迹法的基本原理及其操作和应用。 【实验原理】 蛋白质印迹法又称为免疫印迹法,这是一种可以检测固定在固相载体上蛋白质的免疫化学技术方法。待测蛋白既可以是粗提物也可以经过一定的
蛋白质印迹成像定量分析系统是Western Blot成像系统,适用于所有凝胶成像和化学发光成像。拥有*大的成像区域和*高规格的摄像头。这两种相机选项,600万像素和900万像素,都被冷却到-57°C,并产生65536灰度的16位图像,以实现出色的量化。这些系统在425nm处有73%的量子效率,即使是*微弱的信号也能探测到。 蛋白质印迹成...
一个基因表达的最终产物是产生相应的蛋白,因此检测蛋白是测定基因表达的主要标志。 原理:Western Blotting 是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳,对不同分子量的蛋白质进行分离;并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物上,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印后膜进行杂交,使其与膜上的靶...
Western印迹分析是一种常用的蛋白质分析技术，通过将蛋白质从凝胶转移到膜上，然后与特异性抗体进行反应，实现对蛋白质的检测和识别。Western印迹分析的原理 蛋白质样品经过电泳分离后，通过转膜技术转移到固相支持物（如硝酸纤维素膜或聚偏氟乙烯膜）上。通过显色反应（如酶联免疫斑点试验），检测复合物并获得蛋白质的...