什么是蛋白标记? 生物学研究通常需要使用能够共价结合至感兴趣蛋白的分子标记物,以辅助检测或者纯化标记蛋白和/或其结合伴侣。标记策略可实现不同分子(包括生物素、报告基因酶、荧光基团和放射性同位素)与靶蛋白或核苷酸序列的共价连接。虽然具有多种类型的标记物可供...
什么是蛋白标记? 生物学研究通常需要使用能够共价结合至感兴趣蛋白的分子标记物,以辅助检测或者纯化标记蛋白和/或其结合伴侣。标记策略可实现不同分子(包括生物素、报告基因酶、荧光基团和放射性同位素)与靶蛋白或核苷酸序列的共价连接。虽然具有多种类型的标记物可供选择,...
1.抗体的蛋白酶类或荧光蛋白标记 酶属于蛋白质,其标记到抗体上,利用其与抗体表面暴露的伯氨基(-NH2)进行标记,最简单最粗暴的标记方法是用戊二醛进行偶联,这种标记效率低,品质控制难度比较大,其中含有大量的酶自联或者抗体自联,但是对于简单的科研测试,这个标记手段无疑是最简单快捷的。 除了粗暴的戊二醛标记法,当然也...
常见的标记包括生物素、荧光物质等标记抗体、抗原或其它蛋白,或者将蛋白标记于微球上。对于绝大多数酶、抗原或抗体都是蛋白质范畴,因此,酶标抗体本质上仍属于蛋白与蛋白之间的偶联,其标记原理通常是利用蛋白的α氨基、ε氨基、亚氨基及巯基等亲核性质。 对于微球-蛋白标记而言,主要原...
抗体/蛋白的异硫氰酸荧光素（FITC）标记法 异硫氰酸荧光素 ( Flourescein isothiocyanate，FITC) 是在荧光素的结构上引入异硫氰基( -N = C = S) 得到的，在碱性环境下，抗体的赖氨酸R氨基与FITC的硫碳胺键共价结合，形成牢固的抗体—FITC复合物（图1），从而实现对目标分子的荧光标记。图1 FITC标记抗体...
常见抗体/蛋白标记技术 荧光素标记：使用荧光素如Alexa Fluor系列（AF488\AF594\AF647等）、Cy系列（Cy3\Cy5\Cy7等）、FITC等与抗体或蛋白结合，常用于流式细胞术、免疫荧光和活体成像等实验；酶标记：如辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)标记，通过催化底物生成有色产物或化学发光，用于ELISA、Western Blot...
抗体/蛋白的生物素(Biotin-NHS)标记 生物素(D-Biotin),是一个分子量只有244.31Da的小分子,经活化后(Biotin-NHS)可与蛋白/抗体等生物大分子的氨基结合,不仅可以很好地保持大分子的生物活性,而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用,使其广泛应用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究。
荧光标记指将荧光物质共价结合或物理吸附在所要研究分子的某个基团上,具有无放射物污染、操作简便、容易观察等优点,可借助荧光特性对被标记对象进行定性、定位以及定量分析。荧光标记在蛋白质、核酸、细胞检测及免疫分析等方面显现出巨大潜能。 表1. 常见的用于...
1、细胞内直接标记法 细胞内直接标记法是将荧光染料直接加入到细胞培养基中，通过荧光染料的渗入和结合，实现对细胞内蛋白质的标记。这种方法简单快捷，适用于动态观察细胞内蛋白质的定位和分布。但由于荧光染料无法区分膜蛋白和胞浆蛋白，对于膜蛋白的标记不太适用 2.化学交联标记法 化学交联标记法是利用具有活性官能团...
以下是一些常见的标记蛋白质的方法: 1. 放射性同位素标记:使用放射性同位素(如 32P、14C 等)标记蛋白质,通过放射性检测来追踪蛋白质的行踪。 2. 荧光染料标记:利用荧光染料与蛋白质结合,使蛋白质发出特定的荧光信号,用于可视化和定量分析。 3. 生物素/亲和素标记:生物素是一种小分子化合物,可以与亲和素结合。