GST-pulldown技术主要用于研究体外强烈或者稳定的蛋白质间相互作用,可以验证两种已知的蛋白质可能存在的直接相互作用或者寻找可能与目标蛋白存在相互作用关系的未知靶蛋白,且体外验证蛋白直接相互作用时有较强的特异性。 GST pull-down的基本原理是将靶蛋白-GST 融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽琼脂糖磁珠上,作为与目的蛋白亲和...
1.原理:通过将生物素连接酶与诱饵蛋白融合表达,使诱饵蛋白附近的蛋白质被生物素化,然后通过亲和纯化富集这些被生物素化的蛋白质。2.应用:用于鉴定诱饵蛋白附近的蛋白质,揭示蛋白-蛋白互作网络。十、蛋白质芯片技术:1.原理:将大量蛋白质固定在芯片表面,然后与待测样品进行反应,通过检测反应结果来判断蛋白质之间...
在Cytoscape主界面的file – import - Network from files中导入从STRING中下载的蛋白互作网络文件,窗口弹出后点击OK就能在软件界面的右上角出现蛋白互作网络(图7)。 图7 导入蛋白互作网络 2)其他相关定性定量数据导入 点击file – import - Table from files导入蛋白定性定量数据(如差异分析时的差异倍数和p值),第...
蛋白与蛋白互作测序(Protein-Protein Interaction Sequencing,PPI-Seq)是一种新兴的技术,它以高通量测序为基础,使得科研人员能够在全基因组层面上探索蛋白质的互作关系。 一、蛋白与蛋白互作测序的原理 蛋白与蛋白互作测序的基本原理是利用酵母双杂交系统或者哺乳动物细胞系表达两种蛋白质,观察它们之间是否产生互作。这种互...
蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)是指两个或两个以上的蛋白质分子通过非共价键形成蛋白质复合体(protein complex)的过程。研究蛋白之间的相互作用网络,有助于挖掘核心的调控基因,目前已经有很多的蛋白质相互作用的数据库,在这里,...
免疫共沉淀(Co-IP)和下拉法(Pull-down)是用于确定稳定的蛋白与蛋白相互作用的分析方法。免疫共沉淀(Co-IP):免疫共沉淀在体外检测两种蛋白质之间特定相互作用的存在。Co-IP的原理是当细胞在非变性条件下裂解时,许多细胞内蛋白互作被保留下来。如果蛋白X由一个抗体免疫沉淀下来,与蛋白X结合的蛋白Y也可以被...
蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)在细胞生命活动中发挥着关键作用,并且在不同的时空层面上参与多种细胞学过程,例如,调控细胞周期、蛋白质的合成与分泌、信号转导与代谢等。因此研究蛋白互作对于理解分子调控网络至关重要。目前大家常用的蛋白互作研究手段主要有免疫共沉淀(Co-IP)、Pull down分析,并结合质谱(MS)分析。在大...
作为生命体活动的主要承担者,蛋白质从来不是“孤军奋战”,而是两个或两个以上的蛋白质通过非共价键结合形成复合物,一起参与生命的进程。因此探究蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)对解析生命活动过程与疾病发生发展过程至关重要。随着时代发展,虽然大规模、高通量的生物学研...
蛋白-蛋白互作 蛋白质-蛋白质互作网络(PPI)是一种描述和分析物种内蛋白质之间相互作用关系的网络。它根据物种特定的实验和数据源来系统地建立。它是一种蛋白质组学研究中非常重要的工具,也是生物学研究中常用的分析方法。 PPI网络可以帮助研究者: -分析一种物种中蛋白质的作用,检测重要的蛋白质; -了解一个蛋白质...
聚焦蛋白质互作研究进展与实验方法 蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分,蛋白-蛋白互作网络与转录 调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。本文对蛋白质相互作用方法进行总结。一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和...