菌落杂交法 colony hybridization method 以质粒为载体进行DNA克隆繁殖所用的方法，即从多数寄主菌的菌落中，将含特定的碱基排列顺序的DNA，通过与其碱基排列顺序互补的RNA或DNA杂交而进行检出和选择的方法。一般是使在琼胶培养基上形成含有质粒的菌落后，在其上面压附一层硝酸纤维素薄膜，将菌落移于薄膜上。用碱处理...
菌落原位杂交是一种基因诊断技术,用于检测细菌菌落中的DNA序列。 该技术涉及将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后裂解释放DNA,烘干固定DNA于膜上,与标记的探针杂交,并通过放射自显影检测菌落杂交信号。这种技术可以用于检测特定细菌菌落中的DNA序列,从而确定细菌的存在和数量。 请注意,菌落原位杂交是一种敏感的...
菌落原位杂交的步骤主要包括:DNA探针标记、杂交、洗涤和检测。 首先,需要对DNA探针进行标记。标记物可以是放射性同位素、荧光染料或酶等。标记的目的是为了后续的检测提供信号。 接下来,将标记的DNA探针加入到含有目标DNA的菌落样品中。在杂交过程中,探针与目标DNA发生互补配对,形成稳定的双链结构。这一步需要在适当的...
菌落原位杂交是原位杂交技术的另一种形式。通常应用于确定带有重组分子的细菌菌落中与探针同源的外源DNA插入片段。细菌菌落首先从培养皿上转移到硝酸纤维膜上，经过细胞裂解，DNA释放、变性和固定后与探针杂交。另一相似的技术是噬菌斑原位杂交，不同的是印迹在硝酸纤维膜上的是噬菌体而不是菌落。这些技术专门用来从基因...
菌落原位分子杂交是一种生物学研究技术，用于在活菌落中定位特定基因或RNA序列。该方法首先将细菌菌落转移到滤膜上，然后使用碱性溶液裂解细菌细胞，从中提取核酸。接着，通过中和和洗涤步骤，去除杂质和非特定结合的DNA或RNA。经过烘干后，滤膜上的菌落被用于与目的基因的放射性标记DNA或mRNA探针进行杂交反应...
答案要点:(1)原理:将转化平板上的重组菌落原位转移到固相载体上,然后利用标记探针与载体杂交,根据杂交位点在原始平板上找到目标克隆。(2)步骤:制备目的基因的标记探针,将转化平板上的菌落一一对应转印到硝酸纤维素膜上,保留原初平板,对膜上的菌落进行碱变性,中和,用缓冲液洗去细胞碎片,烤干或紫外照射将DNA交联到膜上...
简述进行菌落原位杂交的基本过程。 噬菌斑杂交法的基本步骤是将重组噬菌体感染的宿主菌倒在平皿上,待生成噬菌 斑后,将与培养皿一样大小的硝酸纤维素薄膜盖在上面,每个噬菌斑中约 105 个噬菌体 就影印转移到膜上。膜揭下后,用碱处理除去蛋白质外壳,使噬菌体 DNA变性并同膜 共价结合,然后用同位素标记的探针与之...
原位菌落杂交是根据微孔滤膜杂交和原位杂交的原理而改良的一种筛选重组体的一种核酸杂交方法。它是将生长在或影印在微孔滤膜上的菌落(或噬菌斑)原位溶菌,原位进行DNA变性并原位固定在滤膜上,然后用放射性标记的探针同固定了的DNA进行杂交经放射自显影后,确定哪一个菌落含有重组的DNA分子,再从参比平板上选取重组体。
菌落原位杂交是将细菌从一主平板转移到硝酸纤维素滤膜上 （二）固相核酸分子杂交类型1．菌落原位杂交（colony in situhybridization）。是将细菌从一主平板转移到硝酸纤维素滤膜上，然后将滤膜上的菌落裂菌以释放出DNA，将DNA烘干固定于膜上与32P标记的探针杂交，放射自显影检测菌落杂交信号、并与主平板上的菌落对位。