荧光素酶报告基因实验步骤 1.克隆荧光素酶报告基因DNA序列:从目标细胞中提取RNA,通过反转录酶将RNA转化为cDNA,再使用聚合酶链式反应扩增出荧光素酶报告基因DNA序列。 2.构建荧光素酶报告基因载体:将荧光素酶报告基因DNA序列克隆到适当的载体上,例如质粒或病毒载体,以便将其导入目标细胞。 3.转染荧光素酶报告基因载体...
🔍 实验步骤: 使用适合细胞培养的白色或黑色96孔板或384孔板进行荧光值检测,避免使用普通透明孔板以免产生干扰。 海肾荧光素酶检测底物在无水乙醇中配制,如体积减少可补足至0.1ml并混匀。 海肾荧光素酶检测工作液应立即使用,或-20℃保存一周,避免长期保存影响效果。 待测药物溶剂含量较高时,设置含有溶剂的细胞培...
双荧光素酶报告基因检测的实验步骤可大致分为以下5步: (1)构建相应的载体; (2)将载体转染至细胞内进行表达; (3)裂解液裂解细胞; (4)荧光检测; (5)数据分析得到实验结论。 双荧光素酶报告基因常用载体 利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性,...
三. 实验步骤 主要分为:质粒转染细胞→双报告基因检测→统计学分析。 质粒转染细胞: 1、细胞铺板:将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。 2、转染:16小时后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA,每个样品设置6个复孔。 1) 配制DNA和转染试剂: 96孔板转染质粒时每孔比例Firefly:Renilla:转染试剂=0.1μg:0.01μg:0.25...
实验步骤 细胞裂解：细胞：在合适的孔板上培养细胞后进行转染并用适当的方法处理细胞。将培养基移除，加PBS轻轻洗涤细胞2次（贴壁细胞进行此操作，悬浮细胞可直接离心收集细胞），吸弃PBS，按如下方案加入Lysis Buffer。注意：Lysis Buffer使用前摇匀，如荧光素酶的表达水平较低，可适当减少Lysis Buffer用量，如24孔板每...
希望通过本文的介绍,读者能够了解植物双荧光素酶报告基因实验的基本原理和操作步骤,从而在实验中取得良好的结果。 实验材料的准备 1.植物基因表达载体:选择适合植物的基因表达载体,通常是含有CaMV 35S启动子的质粒载体。 2.双荧光素酶基因:选择适合植物的双荧光素酶基因,通常是含有GFP和RFP标记的基因。 3.植物材料:...
(5)选用白色不透光的96孔酶标板中每孔加步骤4的上清液10uL,加入100uL预先混好的Luciferase Assay ReagentII,2s后测数据,检测荧光素酶反应强度。注意此步需在避光条件下进行。 (6)测定结束后,每孔添加100uL预先混好的Stop&Glo Reagent,静止2s后,测数据,检测内参海肾荧光素酶反应强度。
双萤光素酶报告基因系统一般将萤火虫萤光素酶报告基因质粒和海肾萤光素酶报告基因质粒共转染细胞，或将这两个报告基因构建到同一个骨架质粒上（如pGL4质粒），分别用不同的启动子启动其表达。◆ 主报告基因载体的选择根据实验目的选择对应的载体骨架。如果是基因调控研究，需要选择不带启动子或其他调控元件的骨架载体。
（B）海肾荧光素酶催化反应原理。实验步骤 ① 裂解细胞 ①对于贴壁细胞：吸尽细胞培养液后，参考下表加入适量的萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液（供参考）；②对于悬浮细胞：离心去上清后，也参考下表加入适量萤火虫萤光素酶报告基因细胞裂解液。② 离心取细胞上清 细胞充分裂解后，10000-15000g离心3-5分钟，取...