1. 在萤光素酶存在的条件下,萤光素+ATP生成萤光素化腺苷酸+ ADP。 2. 将萤光素化腺苷酸+氧气转化为氧化萤光素+AMP以及光。 萤火虫荧光素酶一般是作为主报告基因,将目的基因构建在该载体上,从而反应目的序列的作用结果,因此根据我们的实验目的,可以针对此质粒进行改造,载体的工作原理如下图所示: 海肾荧光素酶催...
将目的基因转录调控原件构建到萤火虫荧光素酶报告基因质粒上,与海肾荧光素酶内参基因质粒共转染细胞,裂解细胞后分别加入荧光素酶底物,会发出生物荧光,从而被荧光测定仪读取。计算萤火虫荧光素酶/海肾荧光素酶的相对比值,可以判断对目的基因转录调控原件的影响。 用途 基因表...
荧光素酶报告基因检测是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence),可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光,常应用于miRNA靶基因验证及启动子转录活性调控...
荧光素酶报告基因实验 (luciferase assay) 一 基本概念 报告基因:基因表达变化或者与基因表达变化相关的细胞事件的一个指示剂。通常是一种编码易被检测的蛋白质或酶的基因,其表达产物非常容易被鉴定。 荧光素酶(luciferase):一类能够产生生物发光信号的酶的统称,其中最有...
荧光素酶是一种产生生物发光的酶,其反应需要荧光素底物和三种辅因子(氧、镁离子和ATP)的参与。在荧光素底物的作用下,荧光素酶催化氧化反应,产生生物发光。这种发光反应是高度特异和高效的,因此被广泛应用于生物学研究中。 荧光素酶报告基因的应用 荧光素酶报告基因被广泛应用于基因表达、蛋白质相互作用、信号通路等...
常见的荧光素酶报告基因包括荧光素酶(也称为火萤酶)和绿色荧光蛋白(GFP)等。 荧光素酶报告基因的应用非常广泛,可以用于研究基因表达和调控、蛋白质定位和运动、细胞增殖和分化等方面。通过将荧光素酶报告基因与特定的调控元件(如启动子、转录因子结合位点等)连接,研究人员可以利用荧光素酶活性来监测基因的表达水平和...
荧光素酶作为一种理想的报告基因,可用于启动子研究、miRNA研究、信号转导通路研究等等。 在报告基因的5'端加上待检测基因的启动子,就可以用来检测转录因子对启动子的作用,启动转录越多,那报告基因的表达量就越大,荧光值越高。如果在报告基因的3'端加上目的基因的3'UTR,就能用来检测miRNA对于目的基因的调控(抑制作...
单荧光素酶检测系统只有萤火虫荧光素酶,该实验往往会受到各种实验条件的影响。而双荧光素酶报告基因检测系统在原有的基础上引入了海肾荧光素酶基因作为内参基因,将两个报告基因构建到同一个质粒上,分别用不同的启动子启动其表达。这样就可以减少内在变化因素对实验准确性的影响,相当于做了标准化,使测试结果不受实验...
1、利用双报告基因检测系统研究miRNA与3’UTR的相互作用 实验目的:验证大鼠miR-1与靶基因ATG133’UTR是否发生作用,并进一步确定miR-1与ATG13 3’UTR的作用位点。 实验方案:构建luc-3’-UTR-WT载体和luc-3’-UTR-mut载体,将其与海肾载体及miRNA mimics共转染293T细胞,转染24-48h后使用双荧光素酶报告基因检...