原代细胞培养操作步骤：1、吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。2、向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜。3、置37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，2~5min后把培养瓶放在 倒置显微镜 下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化。4、吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把
培养：将细胞悬液接入培养瓶中，置于36.5℃温箱培养。如使用CO2温箱培养，瓶盖需拧松半圈。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色。如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。观察：正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察内容包括细胞是否生长良好、形态是否正常、有无污染、培养基...
(1)原代细胞的培养方法 ① 组织块培养法 组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。② 消化培养法 ③ 悬浮细胞培养法 对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、...
将过滤后的细胞悬液进行低速离心（如500转/分钟，5分钟），弃去上清液。用缓冲液重悬细胞，再次离心洗涤，以去除残留的消化酶和细胞碎片。用计数板对细胞进行计数，确定细胞悬液的浓度。三、细胞培养 1.接种细胞：根据实验需要，将适量的细胞悬液接种到培养皿或培养瓶中。培养皿或培养瓶应预先涂有适宜的培养基质（...
原代细胞培养步骤: 1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2、布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。 3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30-60分钟。 4、剪切...
原代细胞培养的实验步骤一:组织收集和处理 从动物或人类组织中取得样本,并在无菌条件下处理。可以使用消化酶、机械切割或抗体磁珠等方法,将组织分解成单个细胞。 原代细胞培养的实验步骤二:细胞分离 通过筛选、沉淀或离心等方法,将可培养的目标细胞分离出来。例如,利用密度梯度离心法可分离出特定类型的细胞。
以下是细胞原代培养的实验步骤和注意事项: 1.组织分离:首先需要从生物体中收集组织样本,如肝、肺、心脏等。样本需要通过消化或机械分离等方法分离出单个细胞或小组织块。消化方法可以使用胰酶或胰蛋白酶等酶类来消化样本,机械分离则需要使用切割器或剪刀等工具。 2.细胞培养:分离出的组织块需要在含有营养物质和生长...
注意:多余水分若不除去,会使组织块剪切不细,消化后的细胞悬液清亮(细胞数少),并可见消化液中有线状或絮状物漂浮。 细胞计数 (1)用吸管混匀待计数的细胞悬液。 (2)将一小滴细胞悬液从盖玻片与载玻片交界部位滴入细胞计数池中。 (3)沉降1分钟,低倍镜下计数血球计数板四大中格的结构完整的细胞,小细胞团计数...
图2 小鼠原代乳腺上皮细胞在不同培养基中的培养状态（Alamri et al., 2016）。02 传代培养操作步骤 2.1贴壁培养 细胞传代培养操作步骤如下：（1）传代前在倒置显微镜下观察细胞形态和生长密度，当细胞生长密度达到80%~90%时，即可进行传代。（2）吸掉或倒掉培养瓶内的培养液。加入PBS清洗1~2次，左右轻轻摇晃...