植物中瞬时表达检测是一种快速的分析系统,它被广泛地用于分析基因功能,如基因表达、蛋白活性及蛋白与蛋白的相互作用等。常用的植物瞬时表达系统有洋葱表皮细胞、愈伤组织、烟草叶片
1、为解决上述技术问题,本发明提供了一种基因瞬时表达方法,该基因瞬时表达方法基于聚合链式反应(pcr)产物快速制备基因瞬时表达盒,大量节省了制备基因表达盒的时间;然后将扩增后的基因表达盒转染至表达系统(如细胞或原生质体等)进行基因瞬时表达,能提高转染成功率和表达效率,增加表达的基因片段量。 2、具体的,本发明的...
不同外源基因的瞬时表达效率大不相同,这一点在单转做亚细胞定位的时候表现得特别明显,效率高者基本每次都能达到100%发光,低者可能转10 次只能表达出一两次,建议在BiFC之前先做个亚细胞定位评价一下两个基因的表达效率,以便调整两个质粒的转化条件。 注射后的植株通常在2 d之后观察,但不同基因表达的时间可能在1-7...
瞬时表达 篇1 1 材料与方法 1. 1 实验材料 1. 1. 1 动植物组织材料、菌种及质粒 大鼠脑组织由长春师范大学中心实验室提供,所用豌豆品种为矮秧豌豆( Pisum sativum L. ) ,GV3101 菌种及豌豆植物病毒表达载体由长春师范大学分子生物学实验室保存。
植物中瞬时表达检测是一种快速的分析系统,它被广泛地用于分析基因功能,如基因表达、蛋白活性及蛋白与蛋白的相互作用等.常用的植物瞬时表达系统有洋葱表皮细胞、愈伤组织、烟草叶片及原生质体等.原生质体处于相同的分离周期,导入的外源基因表达具有较好的同步性,同时不需进行长时间的组织培养,因而对原生质体制备条件的优化...
烟草瞬时表达实验原理 利用农杆菌将外源基因导入到烟草叶片中进行表达,可以借此进行蛋白的亚细胞定位、蛋白互作(BiFC)和蛋白的纯化等实验操作。在荧光蛋白(YFP、GFP、Luciferase 等)的两个 β 片层之间的环结构上有许多特异性位点可以插入外源蛋白而不影响荧光蛋白的荧光活性。BiFC 技术正是利用荧光蛋白家族的这一特性,...
植物遗传转化中，瞬时表达载体与稳定表达载体的区分主要在于转化方式的不同。瞬时表达载体通过农杆菌注射到叶片中实现转化，而稳定表达载体则采用叶盘法进行转化。尽管载体在两种转化方式下相同，但载体的选择需根据构建 DNA 重组体的目的进行考量。在选择载体时，需关注以下几点：目的、克隆扩增或基因表达需求...
烟草瞬时表达 接农杆菌5ml,28℃培养摇床,摇至OD600=1.0。 8000rpm,5min离心收菌(只要能够收集到菌体就可以),配置一定量的含有0.2mM AS(乙酰丁香酮),10mM MgCl2,pH5.6(KOH调pH)的10mM MES 溶液,洗菌体,重悬,离心。 重复步骤2。 重悬后的菌液室温放置3-5小时,用1ml 注射器,去掉针头,注射本氏烟草的叶片...
CFP作为一种荧光蛋白，其瞬时表达需要借助基因工程技术。基因工程技术可以修改细胞的遗传信息，使其产生CFP，并且将其与特定感兴趣的蛋白或结构连接在一起。通过这种改造，当细胞激发 CFP时，它就会发出青绿色的荧光。这种荧光信号可以通过显微镜观察到，并且可以使用特定的荧光显微镜技术记录和分析。在人源细胞系中使用...