星耀小TIP：用于体外酶促环化的RNA分子5’端含一个单磷酸基团，而非体外转录(IVT)产生的三磷酸基团，以下3种方法可将三磷酸基团替换为单磷酸基团：①在IVT反应中，单磷酸鸟苷(GMP)以更高的摩尔比添加到三磷酸鸟苷(GTP)中，利用GMP合成RNA；②通过去磷酸化和磷酸化反应去除5’端三磷酸基团，添加单磷酸基团；③...
环状RNA的体外制备是深入研究其生物学功能的关键步骤。当前较为成熟的体外环化方法主要包括化学连接法、酶法连接和基于核酶的环化方法。化学连接法通过使用溴化氰（BrCN）或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺（EDC）进行连接，但存在形成2’-5’-磷酸键的问题，需要在特定条件下避免。酶法连接则依赖于...
星耀小TIP:用于体外酶促环化的RNA分子5’端含一个单磷酸基团,而非体外转录(IVT)产生的三磷酸基团,以下3种方法可将三磷酸基团替换为单磷酸基团:①在IVT反应中,单磷酸鸟苷(GMP)以更高的摩尔比添加到三磷酸鸟苷(GTP)中,利用GMP合成RNA;②通过去磷酸化和磷酸化反应去除5’端三磷酸基团,添加单磷酸基团;③使用RNA ...
星耀小TIP:用于体外酶促环化的RNA分子5’端含一个单磷酸基团,而非体外转录(IVT)产生的三磷酸基团,以下3种方法可将三磷酸基团替换为单磷酸基团:①在IVT反应中,单磷酸鸟苷(GMP)以更高的摩尔比添加到三磷酸鸟苷(GTP)中,利用GMP合成RNA;②通过去磷酸化和磷酸化反应去除5’端三磷酸基团,添加单磷酸基团;③使用RNA ...
环状RNA (circRNA)是一类单链闭合的RNA分子,由mRNA前体(pre-mRNA)通过可变剪接(AS, Alternative Splicing,外显子环化或内含子环化)产生,内源性circRNA包括编码或非编码性RNA,不包含5'端帽结构(Cap)和3'端polyA尾,缺乏游离末端,因此不易被核酸外切酶降解,比线性RNA更稳定。