熔解曲线法原理 熔解曲线法是一种常用的分析方法,用于确定物质的熔点和纯度。其原理是基于物质在温度变化时会发生相变的特性。 物质在不同的温度下存在不同的相态。当物质的温度升高时,它会从固态转变为液态,这个温度就是物质的熔点。而当物质的温度降低时,它会从液态转变为固态,这个温度就是冷凝点。 熔解曲线法...
探针熔解曲线法原理 在科学的奇妙世界里,有一个叫做探针熔解曲线法的神奇玩意儿。 咱们先来说说啥是熔解曲线。想象一下,一堆分子就像一群小伙伴手拉手紧紧抱在一起。当温度慢慢升高,它们就开始松开手,各奔东西啦。这个从紧密团结到分散开来的过程,就是熔解。 那探针熔解曲线法呢,就是利用了这个有趣的现象。简单...
1、两种(或多种)基因型的qPCR引物序列相同,位于突变位点的上下游。 2、在包含饱和双链染料(如LC Green、EvaGreen等)的qPCR体系中加入引物与样本,在qPCR程序中扩增至接近饱和(一般30-40循环)后,进行熔解曲线分析(缓慢升温过程中连续记录样本荧光)。 3、通过与已知基因型样品比较熔解曲线的形状,确定未知样品的基因型...
1. 染料法标记PCR产物的原理 那在讲探针熔解曲线之前先讲一下染料法的原理,方便理解。在PCR之初,为了对PCR产物进行标记跟踪,在PCR反应体系中,加入过量的SYBR Green I荧光染料,该染料只与双链DNA小沟结合,并不与单链DNA链结合,且在游离状态不发出荧光,只有掺入DNA双链中才可...
PCR-熔解曲线法 PCR荧光探针熔解曲线技术的主要原理是:针对待检测的位点,设计分子信标探针;在PCR扩增完成后,将扩增产物与分子信标探针进行杂交,然后缓慢升高温度,做探针与产物的熔解曲线分析,根据熔解峰对应的温度,读取该位点的基因多态信息。相比其他方法具有操作简单、准确性高、特异性好、结果易判等优势。
要理解探针法熔解曲线原理,首先得知道什么是熔解曲线。简单来说,熔解曲线就是反映核酸分子(比如DNA或者RNA)在加热过程中结构变化的曲线。当核酸分子受热时,双链会逐渐解开变成单链,这个过程中会伴随着能量的变化,而熔解曲线就是对这种能量变化的一种记录。 而探针法熔解曲线,则是在这个基础上引入了特定的探针。这些...
你看啊,这探针法熔解曲线就好比是一场独特的舞蹈表演。那些核酸分子就像是一个个灵动的舞者,它们在特定的条件下开始跳动。而探针呢,就像是专门为这些舞者设计的独特标记。 当温度慢慢升高的时候,就好像是给这场舞蹈加了一把火,让舞者们的动作开始发生变化。原本结合在一起的核酸和探针,也会随着温度的变化而逐渐分...
高分辨熔解曲线(High Resolution Melting, HRM)分析是使用荧光定量PCR仪和双链DNA染料,在PCR扩增后通过实时检测升温过程中双链DNA解链的过程,对DNA片段进行检测。 HRM基本原理: 1、两种(或多种)基因型的qPCR引物序列相同,位于突变位点的上下游。 2、在包含饱和双链染料(如LC Green、EvaGreen等)的qPCR体系中加入引...
熔解曲线(Melting curve)是指随温度升高DNA的双螺旋结构降解程度的曲线。熔解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。定义 总的DNA双螺旋结构降解一半的温度称为熔解温度（Tm），不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系。原理 扩增反应完成后，通过逐渐增加温度同时监测...