Sanger法测序的原理 就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性...
Illumina测序技术为基于基因芯片的边合成边测序,整个平台可解剖为三个系统:一温度控制系统,原理和普通PCR仪一样,来控制反应的进行;二酶控制系统,通过各种酶来控制DNA合成与剪切;三荧光信号收集系统,可以理解为分辨率极高的照相机。在Illumina测序平台的流通池(Flow cell)表面,通过基因芯片技术交错固定了无数条分别文库...
2.去除rRNA:rRNA(核糖体RNA)在total RNA占比一般在80%以上,如果不加区分地进行逆转录,再扩增、建库很可能测序得到的绝大部分序列都是rRNA的序列,但是一般情况下,如果你更关心mRNA等编码基因的序列,rRNA序列不能给我们带来有效的信息,可以说它是无用的。 下面分别介绍单细胞转录组的三个扩增技术: SMART扩增技术: ...
Sanger测序是一种链终止法，其基本原理如下：DNA模板准备：先需要将待测序的DNA片段克隆到适当的载体中，...
表一：主流测序平台一览 Illumina Solexa 合成测序 （sequence by synthesis）Illumina Genome AnalyzerIIx测序原理 Illumina公司的新一代测序仪Hiseq 2000和Hiseq 2500具有高准确性，高通量，高灵敏度，和低运行成本等突出优势，可以同时完成传统基因组学研究（测序和注释）以及功能基因组学 （基因表达及调控，基因功能...
Sanger 测序法原理 构建反应系统 Sanger法测序由一套四个单独的反应构成,每个反应系统包含 四种脱氧核苷酸三磷酸 (dNTP),可以正常合成DNA 每个反应系统加入四种不同的双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP),由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止,另外为了方便定位,需要用荧光或者同...
合成法测序原理 1. DNA 片段化和接头连接:将基因组 DNA 随机片段化成短片断(通常为 200-600 碱基对),并在两端连接特定的接头序列。接头序列用于后续扩增和测序。 2. 锚定:将处理后的 DNA 片段锚定到光学透明的流动槽(flow cell)表面。 3. 桥式扩增:利用DNA 聚合酶在流动槽表面上的接头序列处进行扩增,形成...