例如,在染料饱和的情况下,由于核酸染料EB带正电荷,核酸分子带负电荷,二者在电场中的迁移方向相反,而小分子DNA跑在最前面,相对结合的染料更少些,所以条带弱一些。 解决办法:属正常现象,无需优化。若想优化,可适当提高Marker上样量,选择大小合适的Marker,调整电泳时间;或者可改为泡染法,泡染法不会受染料迁移的影响...
核酸电泳是一种将DNA或RNA样本进行分离、检测及定量分析的技术。通过表征DNA或RNA片段在电场中的迁移速度,可获得关于其大小和数量等信息。该技术被广泛应用于基因组学、生物学、医学及法医学等领域。 1.什么是核酸电泳 核酸电泳是一种利用电流来分离DNA或RNA样品的分析技术。该技术可以通过凝胶电泳或毛细管电泳等方法,...
核酸电泳在许多分子生物学研究应用中都可用来检验实验结果,有时也可用于分离和纯化样品,以便进行后续应用。因此,常规核酸电泳的应用通常可以分为分析和制备两种类型,两者均依赖于分离、溶解和定量技术。这些应用包括: 分析电泳应用 PCR,限制性消化,连接...
核酸片段长度凝胶电泳图谱法，核酸既含有呈酸性的磷酸基团，又含有呈弱碱性的碱基，故为两性电解质，可发生两性解离。但磷酸的酸性较强，在核酸中除末端磷酸基团外，所有形成磷酸二酯键的磷酸基团仍可解离出一个H+，其pK为1.5；而嘌呤和嘧啶碱基为含氮杂环，又有各种取代基，既有碱性解离又有酸性解离的性质，解离...
如上节所讨论的实验装置,核酸电泳工作流程需要执行若干步骤,每一步都可能影响核酸分离的结果。 本页面主要讨论与样品、试剂和运行参数相关的7大额外注意事项,包括: 核酸序列和构象 凝胶试剂性能 凝胶厚度和孔径大小 运行缓冲液类型 凝胶运行中的电压,电...
核酸电泳运行电压(V)=电极间的距离(cm)x 5~10 V/cm。可根据需要分离的DNA片段的大小调整电压。 另:电压过低会减缓核酸的迁移,导致小分子扩散和分辨率过低;电压过高,可能造成缓冲液过热,“微笑型条带”,甚至是样品变性。 6 DNA 构象影响 琼脂糖凝胶电泳DNA 迁移速率与分子大小...
糖-磷酸骨架在结构上重复，故等量的双链DNA几乎带等量的净电荷。如电场强度一定、电泳介质相同，电泳速率就取决于核酸分子的大小和构型。 构型相似的分子：分子量越大、迁移越慢。分子量相同的分子(如质粒)：cccDNA迁移最快、L-DNA次之、ocDNA最慢。固体支持介质 琼脂糖(agarose)聚丙烯酰胺(polyarylamide)
电泳是根据基质上的净电荷、大小和构象对核酸（DNA 和 RNA）和蛋白质等大分子进行分离纯化的方法。由于磷酸基团的存在，核酸具有整体负电荷。因此，它们向阳极移动的速度完全取决于它们的大小。蛋白质含有整体的正电荷或负电荷；这使得蛋白质分子能够向一个称为等电点的 pH 移动，在该等电点分子没有净电荷。通过对...
核酸电泳有不同的类型,其中最常见的是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。琼脂糖凝胶电泳是一种传统的电泳方法,适用于较大的核酸片段分析。而聚丙烯酰胺凝胶电泳则更为常用,可用于分离和定量分析较小的核酸片段。 在核酸电泳过程中,核酸样品首先被加入凝胶槽中,通常是通过挤压或吸引的方式。然后,电泳槽两端施加电场,...