培养昆虫细胞所用的生长培养基通常比哺乳动物细胞培养基的酸度大。例如,用于培养Sf9细胞的TNM-FH和Grace's培养基的pH值为6.2,并且昆虫细胞生长时培养基的pH值逐渐升高,但通常不超过6.4。但昆虫细胞达到较高密度后,生长培养基的pH值也将开始下降。正常的SF9细胞...
目前,常用于培养的昆虫细胞以草地贪夜蛾细胞株Sf9和Sf21,以及粉纹夜蛾细胞株Tn5B1-4(商品名High Five)为主。 下面以Sf9为例,具体讲解一下昆虫细胞培养的要点 ▲Sf9细胞正常生长状态图 细胞基本信息 Sf9昆虫细胞系来自雌性草地贪夜蛾卵巢组织,是利用杆状病毒表达系统进行重组蛋白表达的合适宿主。虽然以往人们利用由...
无血清培养基的研究目前仍在不断发展，有望成为昆虫细胞培养的未来趋势。通过不断优化和改良培养基的配方和条件，可以更好地满足昆虫细胞研究的需求，并为昆虫学研究提供更多的实验手段。修饰昆虫细胞系以改良重组蛋白的生产 修饰昆虫细胞系是一种常用的方法，用于改良和优化重组蛋白的生产。下面详细介绍一下相关知识。...
昆虫细胞杆状病毒表达系统（IC-BEVS）是一类应用广泛的真核表达系统，在高表达蛋白的同时，具有同大多数高等真核生物相似的翻译后修饰加工以及转移外源蛋白的能力。同时由于其不存在任何对哺乳动物有潜在威胁的动物病毒片段，自1983年引入BEVS技术以来，杆状病毒系统已成为用于重组蛋白表达的最通用、最强大的真核载体系统...
▲我司Sf9细胞正常生长状态图 一、昆虫细胞培养史 昆虫细胞的体外培养最早记录于1915年，戈尔德施密特培养飞蛾的精子细胞。随后研究人员开始尝试和培养具有不同兴趣的昆虫细胞，但是遇到了困难，不同细胞在生长、存活的各个发育阶段都有所不同。在昆虫细胞培养研究的早期阶段，主要的挑战是制备模仿昆虫血淋巴的培养基，但...
昆虫细胞杆状病毒载体表达系统是一种真核表达系统,可以在昆虫细胞中表达真菌、细菌、病毒和植物在内的多种外源基因。粉纹夜蛾H5(high five)细胞系、草地贪夜蛾卵巢细胞系(sf21),或由sf21细胞克隆得到的sf9细胞都是在生物制品领域中常用的昆虫细胞,通常用于使用杆状病毒载体表达系统的重组蛋白表达。 作为地球上生物...
杆状病毒产量高—昆虫细胞中表达杆状病毒的理想选择 图3. 使用TransIT®-Insect在High Five中的高效表达重组蛋白 。在6孔板中用2.5µg由hr5增强子/IE1启动子驱动的GFP表达质粒转染进High Five™ 细胞（Thermo Fisher Scientific） 。从转染后72小时的细胞制备总可溶性细胞裂解物。通过SDS-PAGE和考马斯蓝染色...
利用昆虫细胞高表达高生物活性的AAV载体 1 利用昆虫细胞生产生物制品历史概况 自从1959年成功建立了第一个连续昆虫细胞系以来,大量的研究和开发使得昆虫细胞系成为生产用于研究和临床应用的重组蛋白的主要工具。1971年发现并分离出的加州多核多角体病毒(AcMNPV),是发挥昆虫细胞杆状病毒表达载体系统(IC-BEVS)广泛潜力的...
目前常用的真核表达系统中有:哺乳动物细胞表达系统、酵母表达系统和杆状病毒表达系统(也称为昆虫细胞表达系统)。哺乳动物表达系统有许多优点:(1)表达的蛋白能进行翻译后修饰并正确的折叠;(2)能组成性或诱导性地表达目的蛋白;(3)目的蛋白还能以转基因形式表达(Colosimo et al. 2000)。但是,哺乳动物表达系统表达速度...