1.单克隆抗体滴定:在进行多色实验之前,首先对每个单克隆抗体进行单独的滴定,以确定每个抗体的最佳工作浓度。这一步骤是基础,确保每个抗体在后续的多色实验中都能发挥最佳效果。 2.考虑荧光素的兼容性:在多色实验设计中,需要考虑不同荧光素之间的光谱重叠。选择...
是让抗原和抗体双方都在琼脂中各自向对方扩散,在比例恰当处形成抗原抗体沉淀线,观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系,可对抗原或抗体进行定性分析,是抗血清抗体效价滴定的常规方法;D项,免疫浊度测定:本质上属于液体内沉淀反应;E项,火箭免疫电泳:火箭免疫电泳是将单向免疫扩散与电泳相结合的一项定量检测技术,实质上...
5. 抗体滴定注意事项 ① 对于一些全阳的细胞,滴定时可以在样本染色后加入未染色的细胞;② 对于CD3、CD4、CD8这类分群明显且间隔非常开的指标,只做细胞性质确定设门用的时候,可不进行滴定,只滴定那些需要分析比例或MFI的指标;③ 对于表达量比较少的稀有细胞群体,在染色时,可加入该群细胞的父级细胞群的抗体...
1. 打开FlowJo软件,将抗体滴定的若干个FCS数据文件拖入 按照滴定抗体时的稀释比例由高到低放置FCS数据文件 2. 如图:对每个滴定数据进行逐级设门 3. 然后选择live cell,按ctrl+shift+E可选择同组中所有相同名称的行 4. 在File面板中,选择Export/Concat...
实验目的:抗体滴定是指做流式细胞检测之前对所用流式抗体进行最佳的抗体用量和抗体浓度测定的实验,目的是实现最优的信噪比值,并可作为多指标流式检测实验之前对于抗体配色的参考。 实验步骤 一、细胞分离 1. 颈部脱尾处死小鼠,解剖脾脏,将脾脏放入1.5mlEP管中,加入1ml组织消化液(自配),用无菌剪刀剪碎组织,37℃...
滴定的原则: 1. 在进行滴定实验前,应该遵守一个实验一个变量的原则。既然滴定实验要求的是摸索出准确的抗体工作浓度,那在制作样本前,也需要对其他的实验条件进行统一。而这些在滴定实验中的条件,也应该沿用到后续的正式实验中去。 2. 需要统一的条件:样本,样本数量/管,样本体积/管,孵育条件等。总的来说,一个成...
具体的抗体滴定步骤如下:以APC-CD49b(BioLegend Cat#108909)抗体为例,浓度为0.2mg/ml,推荐抗体使用浓度为 ≤0.25 μg/100ul 。起始滴定浓度一般为推荐浓度的两倍(即起始浓度为0.5ug/100ul),做8次2倍稀释。假设用100ul体积,在首孔/管的97.5ul稀释液里加入2.5ul抗体,然后从首孔/管取出50ul加入第二孔/管...
抗体滴定染色指数的计算方法如下: 1. 首先,在显微镜下选择感兴趣的区域,并拍摄相应的数字图像。 2. 使用图像处理软件,将图像转换为灰度图像。 3. 选择一个合适的阈值来分割目标区域和背景。常见的方式是使用全局阈值法(如Otsu方法)或手动选择阈值。 4. 在分割后的图像中,对于每个感兴趣区域,使用图像分析软件测量...
直标抗体滴定 1.15000 X g, 4°C离心10分钟,去除底部团块,这些团块可能会是由于抗体互相之间粘附形成的沉淀。 1.根据抗体包装说明写的抗体浓度(大多数抗体会在管壁标签上注明浓度,如果未注明浓度的,说明书上会有,如果说明书上也没有,可到官方网站查询或咨询厂商的客服),用PBS稀释,做6管稀释,例如:管1:10 µ...
抗体浓度各不同滴定功能显神通 半瓶流式小美腻· 2023-1-5 19591 02:58 Flowjo使用—抗体滴定图制作 延期博士生存指南· 2022-8-19 505 基于噬菌体展示制备抗体的实验操作讲解 踩石者飞飞· 共5课时 8770 10:23 【实验方法】 流式抗体浓度滴定实验以及flowjo分析其结果 ...