4、抗体孵育：一抗的孵育时间一般是室温2个小时或4℃过夜，主要取决于抗体与蛋白的亲和性和蛋白的丰度。一般建议使用较高的抗体稀释倍数结合较长的时间孵育，以保证特异性结合。若孵育时间较长应在4℃过夜进行。二抗孵育在一抗结束后，TBST洗膜5min以去除残留一抗。孵育一般在室温下1-2h。5、清洗：清洗转印膜可...
孵育一抗时,建议使用抗体孵育盒,并根据说明书配置。曝光后,根据条带情况调整一抗浓度,进行浓度梯度设置,以找到最佳稀释浓度。 孵育时间:一抗孵育时间不宜过短,否则抗原抗体结合不全,条带表达低。通常建议在4℃下过夜孵育,但也有不需要低温过夜的情况。 一抗浓度:过高或过低的一抗浓度都会影响结果。过高会导致条...
离子强度对抗体孵育效果有一定作用。封闭剂可减少非特异性吸附现象。常用封闭剂有BSA、脱脂奶粉等。封闭时间一般为30分钟到1小时。孵育过程中要确保抗体均匀分布。振荡孵育可促进抗体与抗原充分接触。但振荡速度不宜过快以防抗体失活。静置孵育时要注意定时轻轻晃动。孵育容器需保持清洁无杂质污染。玻璃容器可能吸附部分...
1.一抗通常价格昂贵,首先根据说明书选用合适的储存温度。 2.熟读抗体说明书,阅读相关文献,查看抗体常用稀释比例,选择合适的稀释比例。 3.孵一抗时,将膜根据大小裁开,将膜放入抗体孵育盒内,注意一抗量最少应该覆盖全膜,我们所使用的抗体孵育盒最少用量为3ml,之后将抗体孵育盒放入4℃冰箱摇床内,孵育过夜。注意配置...
抗体孵育及显影是Wb整个实验的最后一步,显影结果即为最终实验结果。本次主要分享抗体孵育及显影阶段的常见问题及经验。 经验 1.一抗通常价格昂贵,首先根据说明书选用合适的储存温度。 2.熟读抗体说明书,阅读相关文献,查看抗体常用稀释比例,选择合适的稀释比例。
封闭结束后，我们进行抗体孵育。一抗识别膜上蛋白或修饰性抗原表位，二抗则识别一抗恒定区与其结合。最终，通过二抗携带的荧光或酶显色信号，实现对样本中目的蛋白的检测。接下来是一抗及二抗孵育、洗涤的详细流程：将一抗用WB稀释缓冲液按照合适比例进行稀释。封闭结束后，将稀释好的一抗工作液倒入孵育槽中，室温下...
在孵育一抗时用抗体孵育盒孵育，第一次做实验可以根据一抗的说明书进行配置。待曝光结果出来之后，根据条带情况，对一抗的浓度进行浓度梯度设置，以便观察最佳的一抗稀释浓度。通常实验中孵育一抗需要在4℃下过夜，但也有的不需要低温过夜。一抗孵育完毕后，TBST洗膜3次，每次10min，摇床转速为130rpm，我的经验是...
抗体孵育 1、原理: 目的蛋白印迹在膜上,经过封闭之后,印迹目的蛋白与一个或多个抗体孵育。第一个抗体(一抗)与目的蛋白结合,而第二个抗体(二抗)与第一个抗体结合,二抗本身结合有酶或染料,可用来指示蛋白的位置。不过有些一抗也具有直接标记的功能,但使用标记二抗有明显优势。首先不止一个二抗分子能与单个一抗分...
实验继续,洗膜、封闭后进行抗体孵育。,本视频由漂泊的心提供,12次播放,好看视频是由百度团队打造的集内涵和颜值于一身的专业短视频聚合平台
抗体孵育 1、原理: 目的蛋白印迹在膜上,经过封闭之后,印迹目的蛋白与一个或多个抗体孵育。第一个抗体(一抗)与目的蛋白结合,而第二个抗体(二抗)与第一个抗体结合,二抗本身结合有酶或染料,可用来指示蛋白的位置。不过有些一抗也具有直接标记的功能,但使用标记二抗有明显优势。首先不止一个二抗分子能与单个一抗分...