技术原理:1.使用含有限制性内切酶位点的目的引物扩增;2.在DNA聚合酶作用下,启动扩增,产生带有酶切位点的DNA片段(半修饰状态);3.内切酶在其识别位点将链DNA打开缺口,DNA聚合酶延伸缺口3’端并替换下一条DNA链;4.被替换下来的DNA单链可与引物结合并被DNA聚合酶延伸成双链;5.反复进行,使目的序列被高效扩增。 Str...
试述PCR扩增的原理和步骤 答案 PCR技术的基本原理 类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR是一种体外DNA 扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物...
扩增、双微体及均质染色区的关系:如图所示,扩增的基因组片段可从染色体上脱落形成双微体,双微体又可以整合到染色体中发展成为均质染色区。 临床意义:一些基因扩增的检出可以作为肿瘤诊断的标志物,例如HER2/neu的扩增是乳腺癌的标志之一。在血液恶...
PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称,是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。以单链DNA为模板,4种dNTP为底物原料,在引物引导的情况下,模板与底物通过DNA聚合酶的聚合延伸,多…
高表达(Overexpression):即基因蛋白高表达。就是正常时某一个基因指导合成5个蛋白质分子,现在指导合成8个、10个了。某基因突变后极有可能使得该基因复制活跃,这就出现“基因扩增”。也可能使得该基因的指导合成蛋白质的功能更强,这就出现高表达。所以高表达可以由基因扩增引起,也...
基因扩增通常是指某一个特定基因拷贝数选择性的增加,其他的基因拷贝数没有按照比例增加的过程。基因扩增通常是指细胞内选择性的增加,产生大量的拷贝,导致体内的基因序列异常,使错误的DNA复制或者修复,导致遗传元件偶然捕获导致的DNA重复,以及人工聚合酶链式反应扩增。
重组酶聚合酶扩增技术通过模拟DNA体内扩增，在等温条件下产生目的片段。该技术主要依赖重组酶、单链结合蛋白和链置换DNA聚合酶。重组酶能够不通过加热就解开双链DNA。重组酶聚合酶扩增反应开始时，重组酶在ATP的参与下结合引物，形成核酸蛋白复合体，这些复合体能够扫描与引物序列互补的目标双链DNA。接着，核酸蛋白复合体...
基因扩增检测一般是阴性好。 基因扩增是常见的基因突变的一种形式,通过扩增目标DNA片段,能够实现对基因型的快速、准确的检测。一般在基因扩增检测中,阴性结果通常表示样本中不含有目标基因序列或者基因相关突变,即表明疾病或异常状态不存在,具有很强的排除诊断价值。而阳性结果表示样本中存在目标基因序列或者基因相关突变,...
问题一：非特异性扩增非特异性扩增是PCR中最常见的问题之一，其产生原因主要包括：引物与模板的结合位点增加、引物设计不合理、Mg2+浓度过高、退火温度过低等。非特异性产物的存在会干扰特异性产物的检测，导致实验结果不准确。解决方法：1. 仔细检查引物序列，确保引物特异性。可以通过BLAST等在线工具对引物进行比对，...