第三代四质粒系统，为了进一步减少重组成RCV的可能性，进一步根除慢病毒载体的生物安全风险，开发出了更安全的四质粒系统，这是目前被广泛使用的慢病毒载体系统。在三质粒系统的基础上，将gag-pol基因、rev基因（gag，pol 的转运需要 rev）分别构建在2个单独的质粒上，去除了tat基因，形成四质粒的系统。包装质粒，...
慢病毒载体通常由包装质粒、包膜质粒和转移质粒三部分组成。通过将这三种质粒共转染到包装细胞中,可以产生具有感染能力的慢病毒颗粒。 图1慢病毒构建稳转细胞系的示意图 1.2构建流程 载体构建:克隆或合成目的基因,并将其克隆到合适的慢病毒载体中。 病毒包装:将构建好的含有目的基因的慢病毒载体与包装质粒共转染到293T...
(1)病毒感染复数(multiplicity of infection MOI):含义是感染时病毒与细胞数量的比值,即为每个细胞被多少个有活力病毒所感染 2、慢病毒的储存与稀释: 可以将病毒暂时放置于4 ℃保存;如需长期保存请放置于-80℃(病毒置于冻存管,并使用封口膜封口) A.病毒可以存放于-80℃ 6个月以上;但如果病毒储存时间超过6个月...
和元生物自主研发获批专利的Vpack慢病毒包装系统，能够全面满足在科学研究中对基因调控的需求，解决病毒不出毒和滴度低的问题，能保证lncRNA表达更精确，载体荧光表达更亮，病毒出毒更稳定。和元生物一直致力于病毒载体的研制服务，拥有10万+的病毒包装经验/4.6万+病毒载体库，包装GMP级别的病毒质粒。扫描下方二维码，...
本文对慢病毒载体技术发展及原件进行介绍,并分享利用慢病毒构建稳转细胞系的方法。 01 INTRODUCTION 慢病毒属逆转录病毒,其特征在于使用病毒 RT(逆转录酶)和 IN(整合酶)将病毒基因组信息稳定插入宿主基因组。慢病毒可以在非分裂细胞中复制并在其特定宿主(人、猴、猫、马、牛、山羊和绵羊)中引起缓慢进展的疾病,包括...
慢病毒构建稳转细胞系——艾柏森生物 慢病毒(Lentivirus)是一种逆转录病毒,属于慢病毒属,其特点是能够感染分裂和非分裂的细胞,并且具有较长的潜伏期。慢病毒载体因其高效的转导效率和较低的免疫原性,被广泛应用于基因治疗和生物医学研究中。构建慢病毒稳转细胞系是现代生物技术研究中的一个重要步骤,以下是构建慢病毒...
靖瑞百康生物慢病毒载体构建服务包括基因过表达慢病毒载体构建,RNA干扰慢病毒载体构建。可供选择的慢病毒载体包括GFP和RsRed荧光标签、各种抗性筛选标签以及多种启动子充分满足您实验设计的需要。我们提供慢病毒载体构建,慢病毒包装以及基于慢病毒技术的稳定细胞系构建服务。
慢病毒重组载体构建完成后与辅助质粒一起转染进入包装细胞。在包装细胞中,位于两个长末端重复序列(LTR)之间的DNA片段会被转录成RNA,由辅助质粒表达的病毒蛋白将其包装形成病毒颗粒。包装后的活体病毒将会被释放到上清液中,可以直接收集或进一步浓缩病毒转染靶细胞。 当病毒转导靶细胞时,释放到宿主细胞中的病毒RNA借助逆...
目前用于转染的病毒载体包括γ逆转录病毒,慢病毒,腺病毒等,其中γ逆转录病毒和慢病毒属于逆转录病毒,能够将基因组RNA逆转录为DNA,并且整合到宿主基因组中,从而达到目的基因稳定表达的目的。慢病毒稳转细胞系的构建主要分为病毒包装和慢病毒感染细胞两个部分。
图1 稳转细胞株构建流程。 慢病毒及慢病毒载体 1)慢病毒载体的概念 慢病毒(Lentivirus,LV)属反转录病毒科(Retrovirus),是球形包膜病毒,直径约80-120nm,含两个拷贝的单链RNA基因组(图2)。基因组包含在由结构和酶促蛋白核衣壳(NC)、衣壳(CA)、逆转录酶(RT)、整合酶(IN)和蛋白酶(PR)组成的核心内,核心被基...