1. 标准曲线的测定:取12支试管分两组,分别加入0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升的标准蛋白质溶液,用水补足到1毫升,然后加入4毫升双缩脲试剂.充分摇匀后,在室温(20～25℃)下放置30分钟,于540nm处进行比色测定.用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液.取两组测定的平均值,以蛋白质的含量为横座标,光吸收值为纵座标绘制标准曲线.
双缩脲法是一种用于鉴定蛋白质的分析方法。以下是关于双缩脲法的详细介绍: 一、原理 双缩脲法是基于双缩脲反应来进行蛋白质测定的。双缩脲是两个分子脲经加热后放出一个分子氨得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物,这一反应被称为双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似...
在双缩脲法中，我们主要使用双缩脲试剂来与蛋白质进行反应。这种试剂的组成包括硫酸铜和氢氧化钠，其配制过程相对简单。首先，将一定量的硫酸铜溶解在适量的水中，然后加入氢氧化钠溶液，搅拌均匀即可得到双缩脲试剂。值得注意的是，双缩脲试剂的配制过程中需要确保两种试剂的比例恰当，以保证反应的准确性。此外，为...
在测定蛋白质浓度的过程中，我们首先需要准备的是一系列特定的试剂。这些试剂在实验中扮演着至关重要的角色，直接影响到实验结果的准确性和可靠性。1）标准蛋白溶液：在实验中，我们选用牛血清白蛋白（BSA）作为标准蛋白，并利用蒸馏水精确配制出浓度为10 mg/mL的标准溶液。2）双缩脲试剂：双缩脲试剂的配制稍显复杂...
一、双缩脲反应的生成式 在双缩脲法中，存在一个重要的化学反应，即双缩脲的生成反应。通过这个反应，我们可以定量地测定蛋白质的浓度。接下来，我们将详细探讨这个反应的生成式。二、实验原理 双缩脲，亦被称为氨缩脲或缩二脲，是通过在180℃左右的加热条件下，两个分子脲（即尿酸）脱去一个氨后缩合而成的...
本文介绍蛋白质浓度测定常见的另外一种方法,双缩脲法,也称Biuret法。 双缩脲生成反应式 一、实验原理 双缩脲,也称氨缩脲、缩二脲等,它是两个分子脲(即尿酸)在180℃左右加热条件下脱出一个氨后缩合形成的一种有机物,分子内含有两个领接的肽键,其在碱性溶液中可与Cu2+发生络合反应生成紫红色络合物,这种反应...
双缩脲法(Biuret method),是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合…
双缩脲法利用蛋白质中肽键在碱性溶液中与Cu²⁺络合生成紫红色化合物,颜色深浅与蛋白质浓度成正比实现定量。 双缩脲法的原理分析: 1. **反应基础**:蛋白质含有多个肽键,在强碱性条件(NaOH)下与Cu²⁺发生络合反应。 2. **显色机制**:生成紫红色络合物(最大吸收峰在540-560nm),络合物的量与蛋白质...
(缩二脲反应)蛋白质分子中含有肽键– CO-NH- 与双缩脲结构相似。在同样条件下也有呈色反应,在一定条件下,其颜色深浅与蛋白质含量成正比,可用分光光度计来测其吸光度,确定含量。 因此,测蛋白质时叫双缩脲法,并不加双缩脲,样品不消化。反馈 收藏
双缩脲法和lorry法 双缩脲法和lorry法 双缩脲法是基于肽键与铜离子反应的蛋白质定量方法。该方法试剂简单，主要含硫酸铜和碱性酒石酸钾钠。双缩脲法的优点是操作简便，不需要复杂仪器。它能在较宽的蛋白质浓度范围进行定量分析。一般双缩脲法可检测蛋白质浓度在0.5 - 10mg/mL。反应在碱性环境下进行，pH通常...