9) 将细胞筛网过滤的液体吸入干净的50ml无菌离心管中,若取了腹腔细胞可合并置于50ml无菌离心管中,加培养基至30ml,离心1,500rpm,5min,弃上清; 10) 将沉淀重悬于HAT完全培养基,此时饲养细胞已制备好,可按105/孔使用,于融合前一天铺板105个/100μl/孔,亦可当天随融合细胞混合铺板。 B.免疫脾细胞制备: 1) 取...
除了从事小鼠杂交瘤单抗制备,我们还提供多抗和IVD夹心抗体定制服务。
1、抗原制备 用于制备单克隆抗体的抗原纯度越高,单抗制备实验的成功率越高。一般来说,抗原可以是蛋白(天然蛋白或重组蛋白)、多肽、小分子等。 2、免疫动物 2.1免疫动物的选择 通常,根据所用的骨髓瘤细胞可选用小鼠或大鼠作为免疫动物。因为,所有的供杂交瘤技术用的小鼠骨髓瘤细胞系均...
注:本实验室单克隆抗体制备过程有大量根据实际操作进行的改动和经验总结,因此和常见的文献、书籍中所记载的单抗制备方法可能会存在较大差异。因此在技术指南中,除了常规操作步骤以外,还会针对常规操作的每一步进行经验分享和说明。 一、实验动物的免疫 免疫动物选取6-8周龄的雌性BALB/c小鼠。
(10)单克隆抗体的大量制备。 下面简要介绍单克隆抗体的制备过程: 1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋...
接下来笔者就从所在实验室的实际情况出发,针对单抗制备的五个阶段提供一些建议。 1 抗原设计及制备 根据抗原来源及性质,可将抗原分为:小分子、多肽及蛋白。针对不同应用的抗体,我们应该选择不同的抗原设计及筛选方案。 多肽作抗原? 多肽序列尽可能在蛋白表面; ...
制备单抗的方法 获得稳定的杂交瘤细胞系后,即可根据需要大量单抗,以用于不同目的。 一、单抗的大规模制备 目前大量制备单抗的方法主要有两大系统,一是动物体内法,这是国内外实验室所广泛采用;另一是体外培养法。 1、动物体内单抗的方法 迄今为止,通常情况下均采用动物体内单抗的方法,鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由...
小鼠杂交瘤单克隆抗体制备的每个阶段都会涉及到很多细节,对这些细节的把握与否很大程度上决定着实验的成败。 下图展示了小鼠单抗制备的大概流程: 接下来笔者就从所在实验室的实际情况出发,针对单抗制备的五个阶段提供一些建议。 1 抗原设计及制备 根据抗原来源及性质,可将抗原分为:小分子、多肽及蛋白。针对不同应用的...
1、单克隆抗体制备主要步骤包括:动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、单抗的鉴定及制备等。1 动物免疫根据抗原的特性选择合适的免疫方案,对于可溶性抗原免疫原性弱,一般要加佐剂。常用佐剂为福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状。(...