那么半定量就是，虽然我们不知道A和B表达的具体数值，但我们可以通过PCR的方式，在其他条件相同时，根据条带亮度判断A和B表达量高低，两两相比，亮的表达量就高，暗的表达量就低。当然，半定量不但可以比较不同基因表达量的高低，也可以比较相同基因在不同材料中表达量的高低。比如，想知道A基因是否受到盐胁迫的影...
半定量反转录-聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量。以半定量RT-PCR为基础建立起来的mRNA含量测定技术,较含内标化...
解析 半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的情况下使用,用于测定体内目的基因的表达增加减少与否,即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因(如β-actin)的电泳带的相对含量比较,观测目的基因表达增减,另外还要做一...结果一 题目 什么是半定量 RT- PCR 答案 半定量RT-PCR一般是在没有条件做 实时PCR 的...
做半定量RT-PCR两个多月了，基本天天都拿从小鼠组织制取单细胞悬浮液提取RNA逆转录，然后PCR。之前用...
半定量RT-PCR的实验原理和方法步骤 以下实验步骤仅供参考: 1 样品RNA的抽提 ①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。 ②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚...
半定量RT-PCR 逆转录PCR RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写。逆转录PCR,或者称反转录PCR reverse transcription-PCR, RT-PCR ,是聚合酶链式反应 PCR 的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。逆转录...
在半定量RT - PCR里,我们通过比较不同样本里目标基因的扩增产物的量,来判断这个基因在不同情况下的表达水平是高了还是低了。比如说,我们想知道一种植物在干旱环境和湿润环境下某个基因的表达差异。我们就分别从干旱环境下的植物和湿润环境下的植物细胞里提取RNA,然后进行RT - PCR。如果干旱环境下植物的这个基因...
半定量RT-PCR的实验原理和方法步骤以下实验步骤仅供参考:1样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入的氯仿,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相,中间...
以半定量 RT-PCR为基础建 立起来的mRNA含量测定技术,较含内标化的RT-PCR定量测定的mRNA的方法 更为简便可行。这种方法不另设 内标准',排除了俩对不同引物之间的相互抑制和灵 敏读差异,而且具有明显的剂量-效益关系和良好的重复性。步骤:1.抽提RNA,2.反转录获得cDNA , 3.以cDNA为模板做PCR注意:步骤1, RNA...