制备目的片段时常用的方法有两种,方法一是通过PCR扩增片段或者载体上的目的序列,在此过程中,如果制备目的片段是为了在下游进行传统的酶切酶连方式,就需要引入限制性酶切位点,设计与线性载体两端相同的酶切位点,以便酶切后通过匹配的粘性末端进行连接;如果制备目的片段是为了在下游进行同源重组,则需要引入15-25 bp的...
分子克隆: (1)典型的基因重组(切,接,转,增,检) 应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA)与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子,继而通过转化或转染宿主细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增提取获得大量同一DN...
基因文库的构建基因文库是指整套基因组DNA片段分子克隆的总体。基因文库的构建包括基因组DNA的随机片段化、载体DNA的制备、重组体DNA的体外包装、重组噬菌体感染大肠杆菌
制备目的片段时常用的方法有两种,方法一是通过PCR扩增片段或者载体上的目的序列,在此过程中,如果制备目的片段是为了在下游进行传统的酶切酶连方式,就需要引入限制性酶切位点,设计与线性载体两端相同的酶切位点,以便酶切后通过匹配的粘性末端进行连接;如果制备目的片段是为了在下游进行同源重组,则需要引入15-25 bp的...