通常是使用刀片切下并收集含有目的DNA片段的凝胶,这样就可回收凝胶中的DNA样品。 琼脂糖凝胶电泳的下一步还可以是印迹转移,将DNA或者RNA转移到硝酸纤维素膜上,然后使用放射性的探针去检测电泳分离样品中特定的DNA或者RNA的序列。 对于分离大于15kb到20kb的大分子量DNA片段,如基因组,标准的DNA琼脂糖凝胶电泳并不是最佳...
琼脂糖凝胶是一种聚合物,可以形成一种网络结构,在凝胶中进行电泳分离。DNA分子在凝胶孔隙中相互碰撞,分子大小不同的DNA分子会在不同的速度下向阳极移动,从而实现了DNA分子的分离。 实验步骤: 1.实验前的准备: a.制备琼脂糖凝胶:取一定量的琼脂糖粉末加入缓冲液中,加热溶解后冷却至大约50℃左右,倒入琼脂糖凝胶板...
将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中。添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止。 3. 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释...
将盖子放在电极黑对黑、红对红的罐子上,并将电极插入一个电源盒,也是黑对黑、红对红,这与凝胶罐一起构成了凝胶电泳仪。 确保电极和盖子的方向正确,否则你的样品会从孔中倒流到运行缓冲液中。设定凝胶运行的时间和电压,120V、35分钟是一个很好的近似值,但是这应该根据所使用的凝胶比例和预期分离的片段大小进行调...
具体步骤包括溶解琼脂糖和制备凝胶。根据质量体积比，如1克琼脂糖配100毫升电泳缓冲液，制得1%琼脂糖凝胶。低浓度适合分离大片段，高浓度则利于小片段的区分。溶解琼脂糖后，加入溴化乙锭（需谨慎，致癌物质）并冷却凝固。在凝胶模具中，通过梳子形成上样孔，将DNA样品加入。凝胶制作完成后，还需进行电泳...
1、 5×TBE电泳缓冲液:配方见实验一。 2、 6×电泳载样缓冲液:0.25% 溴粉蓝,40%(w/v) 蔗糖水溶液,贮存于 4℃。 3、 溴化乙锭(EB)溶液母液:将EB 配制成10mg/ml,用铝箔或黑纸包裹容器,储于室温即可。 【实验步骤】 1、 DNA酶切反应 1) 将清洁干燥并经灭菌的eppendorf 管(最好0.5ml)编号,用微量移液...
实验步骤 （1）准备制胶架，⽤蒸馏⽔将电泳槽和梳⼦冲洗⼲净，放在⽔平桌⾯上，并架好梳⼦ （2）配制琼脂糖凝胶及倒胶，琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 a.以1%的胶为例，三⾓瓶内0.6g琼脂糖+60ml(0.5xTBE)煮胶溶解冷却⾄60C(不烫⼿)b.加⼊溴化⼄锭溶液（终浓度0.5ug/ml...
聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的一种区带电泳。这种凝胶是以丙 烯酰胺单体(Acrylamide,简写为Acr)和交联剂N,N'-甲叉双丙烯酰胺(N,N'-Methylena Bisacrylamide,简写为Bis)在催化剂的作用下聚合而成的。 Acr和Bis在它们单独存在或混合在一起时是稳定的,且具有神经毒性,操作时应避 免接触皮肤。但...
原理:在SSCP测定中,双链DNA(dsDNA)被变性成为单链DNA(ssDNA),每一条单链DNA都基于它们的 内部序列而呈现出一种独有的折叠构象,即使同样长度的DNA单链因其碱基顺序不同、甚至单个碱基的不 同会形成不同的构象。这些单链DNA在非变性条件下,用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,单链DNA的迁 移率和带型,都取决于其...