1. 爬片 玻片置于培养皿中(6 well or 4 well dish)-20℃预冷,铺matrigel;细胞团块传代于含玻片的培养皿中,按照实验安排培养 2. 固定 1) 弃上清液,PBS洗一遍; 2) 4% PFA 室温固定15 min;弃PFA(于专用废液缸) 3) 1×PBS清洗,5 min 3. 通透 1% TritonX-100 通透2 min;or 0.1% TritonX-100 通透...
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细胞的通透: 打孔:0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min。 封闭:PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min。 一抗:水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗(GFAP 1:100)并放入湿盒,4℃孵育过夜; 加荧光二抗:PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸...
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