汉恒生物无缝克隆试剂盒20ul重组反应体系中核酸(线性化载体+PCR产物)使用量为0.02-0.5 pmol,载体与插入片段的摩尔必为1:2-1:5。如果插入片段长度大于克隆载体时,则需要将插入片段看作是载体,而将载体看作是插入片段来计算需要加入的核酸片段量。如果线性化克隆载体和插入片段扩增产物未进行DNA纯化直接使用,那加入总...
经过转染后,导入的核酸游离在细胞核中,可转录表达而不进行复制,也有极小部分会整合到受体细胞的基因组中,随宿主基因组一同复制。 作为最常见的转染载体,质粒DNA含有重组基因和调控元件,可以转染到细胞中,用于基因表达调控,研究基因的功能、基因产物的突变分析和生化表征以及基因表达对细胞健康和生命周期的影响。对哺乳动...
近期小恒分享了主题干货：克隆与表达干货。其中包括：质粒构建、质粒转染、及qPCR检测基因表达~本期将继续向大家介绍如何用Western blot实验检测目的基因的表达情况。蛋白质印迹法（Western blot，WB）是一种利用“抗原-抗体”特异性结合来检测组织或细胞样品中特定蛋白质表达水平的常用方法。作为一种经典的实验方法，WB...
染料法操作简单、灵敏度高且成本较低，被广泛地应用于科研中对目的基因定量分析和基因表达量的研究。但是SYBR Green I是一种非特异性荧光标记，如果反应体系中具有非特异性扩增和引物二聚体，也会被检测到荧光信号，从而对检测结果产生影响。实验中我们通常需要设计特异性引物，来防止产生非特异性扩增。那么在实验中如...
与克隆载体不同，表达载体是用于使外源基因在目标细胞中表达的工具。表达载体载有外源基因的DNA序列，以及一些重要的调控元件，如启动子（promoter）、转录终止子（terminator）和增强子（enhancer）。启动子是一段DNA序列，用于启动基因的转录过程。转录终止子是一段DNA序列，用于终止基因的转录过程。增强子是一段DNA序列...
答:(1)克隆载体和表达载体的功能不同: ①克隆载体是在克隆过程中用到的各种质粒,比如为了扩增目的基因的高拷贝质粒、为了方便测序的测序质粒、为了连接PCR产物的TA质粒、为了重组的穿梭质粒等等。克隆载体一般有较强的复制能力,利于基因的保存和扩增,而且提供丰富的酶切位点等等。它不必有强启动子,因为不重于表达。
pcdh主要在神经系统中表达,自发现pcdh对神经突触有作用以来,人们对pcdh的研究越来越多,不断发现原钙黏蛋白与肿瘤的发生、神经发育等密切相关,为了能进一步研究pcdh 8在神经系统中的表达方式和作用机制,试验克隆和表达了pcdh 8蛋白的部分肽段,并对其进行分离、纯化,用免疫大鼠的方法获得了鼠抗pcdh 8的多克隆抗体,为...
克隆表达的流程 克隆表达的流程可以分为以下步骤: 1.设计引物:根据目标基因的序列设计引物,包括正向引物和反向引物。 2. DNA提取:从目标细胞或组织中提取总DNA。 3.聚合酶链式反应(PCR)扩增:使用DNA提取物作为模板,通过PCR扩增目标基因的DNA序列。 4.酶切与连接:将扩增得到的目标基因DNA与克隆载体(如质粒)进行酶...
1、克隆载体:采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的 外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖。2、表达载体:在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件,使目的基因能够表达的载体。克隆载体能携带DNA片段进入宿主细...