解析 我们在构建载体的时候,一般在酶切位点的前面加2到3 个碱基,碱基一般为G或C,还应注意保护碱基加完后,分析一下是否形成了新的酶切位点.结果一 题目 设计引物的时候,酶切位点的前面的保护碱基应该怎么加,遵循什么原则. 答案 我们在构建载体的时候,一般在酶切位点的前面加2到3 个碱基,碱基一般为G或C,...
1关于设计引物需要在引物中引入酶切位点,想用Xba1和Kpn1,想问下保护碱基怎么加?阅读框怎样能不改变,另外,还用考虑发卡结构什么的吗?请问除此之外,还有没有其他的方法可以更方便的方法引入酶切位点? 2 关于设计引物 需要在引物中引入酶切位点,想用Xba1和Kpn1,想问下保护碱基怎么加?阅读框怎样能不改变,另外...
保护碱基通常是GCGC和GGCC,由于限制位点的掺入,经PCR扩增的靶DNA片断可以方便的克隆到所选的载体分子上,毕竟酶不可能那么精准的识别酶切位点。如果要加在序列的5‘端,就在酶切位点识别碱基序列(红色)的5’端加上相应的碱基(黑色),相同如果要在3‘端加保护碱基,就在酶切位点识别碱基序列(...
保护碱基直接加到引物酶切位点的5‘端就可以,不同的酶切位点,有不同的保护碱基。
实践证明,5‘端三个碱基就够,
酶切位点的5‘端加保护碱基就行。酶切位点的切割率中的2hr 20hr是切割2小时、20小时的效率。
保护碱基的使用是和你设计的酶切位点有关,可以提高酶切效率,你用什么公司的哪种酶就需要相应特定序列的保护碱基,自己搜下说明书吧。有些高效的酶对保护碱基的要求不高
可在网站上搜到。如你想找EcoRI的保护碱基,你可在百度或者GOOGLE里输入EcoRI的保护碱基,你就可以找到。 any333(2015-1-13 14:47:11) 不同的内切酶需要不同的数目的保护碱基,建议你看一下宝生物的产品说明书。 eric930(2015-1-13 14:47:43)
没关系的,酶切位点的碱基是要被切掉的,不是吗?基因上的终止密码子如果没被破坏就不用再加终止密码,如果破坏了当然要加了。
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