1. 配制完全培养基 (DMEM基础培养基+10%FBS+1%双抗,不同细胞完全培养基不同,本实验以MDA-MB-231细胞为例); 2. 取复苏后培养24h后的细胞,在显微镜下观察细胞密度和生长状态,若细胞密度长至90%左右,可以传代; 3. 将细胞培养液倒入废液缸,沿着瓶身侧面加入少量的PBS,轻轻晃动瓶身使PBS充分接触细胞,冲洗后将...
(3)传代比例 当第一次培养一种细胞系或者是培养经验较少的早期培养物时,第一次传代最好以1:2,并且注意细胞浓度。当细胞已在实验室中扩增起来,可以根据细胞的增速逐渐增加传代比例,需要注意的是,在试图增加传代比例时,始终保持一瓶以低比例传代。不需要胰酶消化的悬浮细胞,可以采取半换液的方式进行传代:将细胞悬...
实验步骤 以HEK-293T细胞传代为例 1. 从培养箱拿出细胞，镜下观察细胞状态，并判断是否达到了可传代的密度；2. 回到超净台中，吸去培养基，加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸去PBS，加入0.25%胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞；3. 放入37℃培养箱，开始消化并计时，消化时间跟据细胞特性有所不...
二、细胞传代的基本步骤1. 细胞分离：将原代细胞或传代细胞从培养容器壁上分离下来。常用的分离方法有机械分离法和酶解法。机械分离法是通过轻轻敲打或刮取细胞的方法，使细胞从培养容器壁上脱落。酶解法是通过加入特定的酶，使细胞间的连接变得脆弱，容易分离。2. 细胞洗涤：将分离下来的细胞进行洗涤，去除残留的酶...
细胞传代步骤 一、贴壁细胞：以HeLa细胞的传代培养为例 1. 选取生长密度 80%左右即处于生长对数期的HeLa细胞，在超净工作台中操作，吸去培养皿中的旧培养基，加入1-2 mL的PBS溶液，轻轻润洗，漂洗细胞以除去残留的血清。2. 吸去培养皿中的PBS溶液，加入1-2 mL 0.25%胰蛋白酶消化液（消化液能够覆盖细胞即可...
《中国药典》2020年版9203药品微生物实验室质量管理指导原则中指出:“工作菌株的传代次数应严格控制,不得超过5代(从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代),以防止过度的传代增加菌种变异的风险。”这个要求规定了菌种传代的起点和终点,目的是控制菌种在遗传过程中出现的过度...
工作菌株的传代次数应严格控制，不得超过5代（从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代），以防止过度的传代增加菌种变异的风险。1代是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养，任何形式的转种均被认为是传代1次。必要时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。哪里有参照方法？之前发表过一篇，可以参照...
其中最主要的部分就是进行细胞传代。 什么是细胞传代? 1.传代培养是指将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程。对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。 2.传代培养中的细胞传代培养(subculture),当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一方面...
一、什么是传代? 传代即去除原培养基并将细胞从原培养体系转移到新鲜的生长培养基中,该过程可使细胞系或细胞株进一步增殖。 二、何时传代? 当细胞密度达到铺满整个瓶底有效基质时,或者当细胞浓度超出培养基的能力时,细胞生长停止或者生长速度大大减慢,此时需要将细胞进行分瓶、传代或者转移,传代后一般以较低的密度和...