答:在目前人类应用的基因编辑工具中,主要有三种:ZFN,TALEN 和 CRISPR/Cas 相同点:都能够用于哺乳动物细胞和各种真核生物进行基因敲除,基因修复和基因插入 不同点:①有效性不同:TALENs 在使用与上下游相关的序列的时候比ZFNs 显著的具有更多的突 变产生。 CRISPR 比 TALENs 效率更高;②特异性不同:ZFN 和
CRISPR技术可以精确地识别和切割目标DNA序列，具有很高的特异性，能够在短时间内实现大量细胞的基因编辑，可以应用于多种生物体，与上述两种编辑技术相比，CRISPR技术的优势非常明显，操作简单，效率更高，且成本相对更低。尽管CRISPR技术具有很高的特异性，但仍存在脱靶效应，造成基因组DNA大片段的缺失、易位和破裂，且进...
图片来源:Thomas Gaj, Charles A. Gersbach, and Carlos F. Barbas III. (2013) ZFN, TALEN, and CRISPR/Cas-based methods for genome engineering. Trends in Biotechnology, 31(7): 397-405. TALEN技术的核心原理就是在同一个蛋白(TALEN)上有序地实现引导进入细胞核、靶位点DNA的特异性识别和靶位点DNA的...
CRISPR技术可以精确地识别和切割目标DNA序列,具有很高的特异性,能够在短时间内实现大量细胞的基因编辑,可以应用于多种生物体,与上述两种编辑技术相比,CRISPR技术的优势非常明显,操作简单,效率更高,且成本相对更低。尽管CRISPR技术具有很高的特异性,但仍存在脱靶效应,造成基因组DNA大片段的缺失、易位和破裂,且进行体内实验...
CRISPR技术可以精确地识别和切割目标DNA序列,具有很高的特异性,能够在短时间内实现大量细胞的基因编辑,可以应用于多种生物体,与上述两种编辑技术相比,CRISPR技术的优势非常明显,操作简单,效率更高,且成本相对更低。尽管CRISPR技术具有很高的特异性,但仍存在脱靶效应,造成基因组DNA大片段的缺失、易位和破裂,且进行体内实验...
在目前人类应用的基因编辑工具中,主要有三种:ZFN,TALEN和CRISPR/Cas。全部三种基因编辑工具(ZFN,TALEN和CRISPR/Cas系统)都能够用于哺乳动物细胞和各种真核生物进行基因敲除,基因修复和基因插入。现在我们在我们的工具箱中有全部的基因编辑工具,究竟哪一个才是最好的选择呢?这可能主要取决于使用者的需要。
与TAL蛋白一样,CRISPR/Cas系统可以通过调整激活和抑制结构域来控制基因表达,而不是编辑。然而,问题仍然在于系统的特异性(向导RNA序列比ZFN或TALEN所靶定的大部分序列更短,这意味着脱靶效应的几率更高)。近期发表的一些文章,包括Doudna和Church的文章,也证明了脱靶效应是真实存在的。
(1)操作简便,靶向精确性更高。编码sgRNA的序列不超过100bp,因此比构建TALENs和ZFN更简单,用于CRISPR的sgRNA识别序列仅需20个核苷酸。 (2)CRISPR/Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰,其基因修饰可遗传。 (3)基因修饰率高,尤其在基因敲入...
2. 成本效益:与 ZFN 和 TALEN 相比,CRISPR/Cas9 的实施成本通常更低。 设计和合成 gRNA 的简便性,以及表达 Cas9 的质粒和其他试剂的广泛使用,使得 CRISPR/Cas9 对许多研究人员来说更容易获得且负担得起。 3. 多功能性:CRISPR/Cas9 具有高度通用性,可用于各种基因编辑应用,包括基因敲除、基因插入、基因替换和转...
TALEN目标位点由两个TALE结合位点组成,这两个位点间通过不同长度的间隔区序列(12-20bp)分开。 TALE可以被设计成仅仅识别左半侧位点或右半侧位点。图片来源: Thomas Gaj, Charles A. Gersbach, and Carlos F. Barbas III. (2013) ZFN, TALE...