TALEN是DNA识别结合区域TALE和非特异性核酸内切酶Fokl组合后的产物，通过二聚体化使目的片段产生双链断裂，再激活细胞内的NHEJ修复机制修复DNA双链损伤，在修复的过程中引入indel，达到基因点突变的目的。TALEN比ZFN有更高的特异性，能高效地实现基因组的编辑和修饰，并且TALEN的DNA结合是模块化的，可以方便地组合和修...
ZFN.TALEN.CRISPR-Cas三种基因编辑工具 基因打靶的里程碑事件——ZFN、TALEN、CRISPR-CaS 姓名：邢亚迪专业：作物遗传育种导师：何光华教授 任何对基因进行特异性修饰的工具都是由两个部分组成：1DNA特异性识别结合域2核酸内切酶活性区域 ZFN=DNA识别域+核酸内切酶TALEN=DNA识别域+核酸内切酶CAS9=DNA识别域+核酸内切酶 ...
TALEN是DNA识别结合区域TALE和非特异性核酸内切酶Fokl组合后的产物,通过二聚体化使目的片段产生双链断裂,再激活细胞内的NHEJ修复机制修复DNA双链损伤,在修复的过程中引入indel,达到基因点突变的目的。TALEN比ZFN有更高的特异性,能高效地实现基因组的编辑和修饰,并且TALEN的DNA结合是模块化的,可以方便地组合和修改以适...
TALEN技术的原理并不复杂,即通过 DNA识别模块将TALEN元件靶向特异性的DNA位点并结合,然后在FokI核酸酶的作用 下完成特定位点的剪切,并借助于细胞内固有 的同源定向修复(HDR)或非同源末端连接 途径(NHEJ)修复过程完成特定序列的插入 (或倒置)、删失及基因融合(图2)。 图2 TALEN进行基因组编辑的原理。利用位点特异性...
TALEN是DNA识别结合区域TALE和非特异性核酸内切酶Fokl组合后的产物,通过二聚体化使目的片段产生双链断裂,再激活细胞内的NHEJ修复机制修复DNA双链损伤,在修复的过程中引入indel,达到基因点突变的目的。TALEN比ZFN有更高的特异性,能高效地实现基因组的编辑和修饰,并且TALEN的DNA结合是模块化的,可以方便地组合和修改以适...
1. TALEN结构及技术原理 1.1 TALEN的典型结构 如前文所述,典型的 TALEN由一个包含核定位信号(Nuclear localization signal, NLS)的N端结构域、一个包含可识别特定 DNA序列的典型串联TALE重复序列的中央结构域,以及一个具有FokI核酸内切酶功能的C...
1. TALEN结构及技术原理 ■1.1 TALEN的典型结构 如前文所述,典型的 TALEN由一个包含核定位信号(Nuclear localization signal, NLS)的N端结构域、一个包含可识别特定 DNA序列的典型串联TALE重复序列的中央结构域,以及一个具有FokI核酸内切酶功能的C端结构域组成。不同类型的TALEN元件识别的特异性DNA序列长度有很大区别...
2.1 CRISPR / Cas技术应用于临床治疗 使用可编程的RNA引导的DNA核酸内切酶进行基因组编辑与上述的位点特异性核酸酶不同,CRISPR/ Cas系统最近成为ZFN和TALEN的潜在简便有效的替代物,可用于诱导靶向遗传改变。在细菌中,CRISPR系统通过RNA引导的DNA切割提...
在CRISPR/Cas9系统中,Cas核酸酶在DNA位点上产生双链断裂,而这一位点是由短的向导RNA决定的。与其他系统相同,断裂也通过NHEJ或HDR来修复。 与ZFN和TALEN不同的是,CRISPR/Cas不是人造的;此系统为细菌提供了适应性免疫的一种形式。2012年8月,美国加州大学伯克利分校的Jennifer Doudna和德国汉诺威医学院的Emmanuelle Cha...
•CRISPR/Cas(clusteredregulatoryinterspacedshort palindromicrepeat/Cas-basedRNA-guidedDNA endonucleases) 特异性 DNA识别域 非特异性 核酸内切酶 + 2 ZFN原理 ZFN=DNA识 别域+核酸内 切酶 DNA识别域: 由一系列Cys2- His2锌指蛋白(zinc- fingers)串联组成( 一般3~4个),每个锌 指蛋白识别并结合一个 特异的...