这种简单易用的pBT Y3H系统将有助于高阶蛋白复合物的高通量分析。 应用前景 pBT的一个优点是它在单个载体中包含GAL4BD-bait、tTA和3rd蛋白,这意味着它与现有的GAL4AD-prey文库完全兼容,如本研究使用的pACT2 cDNA文库。已经使用了GAL4 Y2H系统的研究人员可以通过简单地用pBT替换诱饵载体,轻松地将筛选升级为Y3H...
Y3H interaction between MTX-Cmpd2.1 and TgBRADIN.Anahi V. OdellFanny TranJenna E. FoderaroSéverine PoupartRavi PathakNicholas J. WestwoodGary E. Ward
二、Y3H方法鉴定甲基化阅读器的原理 作者开发了一个修饰的Y3H系统，它在酵母细胞中表达三种蛋白质，即一个诱饵，一个修饰诱饵的PKMT，和一个负责识别甲基化诱饵的猎物。如果甲基化的诱饵与猎物相互作用，GAL4转录因子就会重组并触发报告基因的转录(图2a)。为了验证被选择的猎物对甲基化依赖的诱饵识别的特异性，该...
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研究设计包括建立用于鉴定三种蛋白质的Y3H实验设计模型、验证Y3H方法鉴定甲基化阅读器的原理、在酵母细胞中表达诱饵、修饰诱饵的PKMT、负责识别甲基化诱饵的猎物以及筛选过程。如果甲基化的诱饵与猎物相互作用，GAL4转录因子会重组并触发报告基因的转录。通过验证被选择的猎物对甲基化依赖的诱饵识别的特异性，...
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